转正考核鉴定表个人总结十篇

---

转正考核鉴定表个人总结篇1

在学校两址办学的情况下，协调好校内校外的各项工作。

办理上级及校外来的公文、函件等日常公文处理工作、保管校章，收文、发文，完成各项临时工作。

配合其它部门参加各级各类评选、督导、展示、研讨等活动。组织国际联校学科评估活动。

加强自身思想建设，不断提高政治素质和业务素质，提高管理水平，提高服务能力。

二.人事工作

（一）深化用人制度改革，大力宣传“教师聘用合同制”，做好聘任、考核工作

1．聘任：2005年4月：聘任意向调查表；2005年7月：签订协议（在职、见习、试用、外聘返聘）

2．考核：

推行教师职业道德考核制度和奖惩制度，与我校《教师评价》相结合，落实海淀区《师德评价手册》。

（二）教师培养，“十五”继续教育工作

按照区教师继续教育办公室的统一要求，做好“十五”继续教育工作。

1．英语口语能力：经过努力，我校已有50人达到规定标准，继续组织未达标教师参加辅导及测试。

2．应用信息技术能力：参加计算机a级考试，协调组织教师参加区继续教育办公室组织的统一培训。

3．校本培训：继续以专家讲座、学科教科研活动、学历达标等多种形式开展；加强对教师自学的要求。

4．加强教师素质建设，引导教师自主发展，如：写一笔好字、做好教师生涯规划等，努力提高教师自我心理调节及心理辅导能力。

5．配合其它部门，做好体育教师的继教工作。

（三）新进教师的各项工作

完成新进教师的培训、考核、转正、调入等各项工作。

（四）协助各部门，培养骨干教师，宣传优秀教师的成功经验，促进“两名工程”实施；探讨适合我校的优秀教师培养模式。开展各项评优工作。

1.加强师德建设，开展“师德先进”的评选工作（校级、中心级）。

2.开展“青年先进教师”的评选工作（校级、区级）。

3.做好各级“学科带头人”、“骨干教师”的评选工作（中心级、区级）。

（五）做好工资管理工作，逐步建立我校个人工资档案。

（六）做好社会保障系统的各项工作，完成失业保险及养老保险（外聘教职工）的年度审核工作，本学期重点做好外聘教职工的医疗保险工作。

（七）协调配合各部门，做好关于“住房补贴”的各项工作

（八）做好人事档案，各项人事报表统计工作；做好离退休、在职人员的信息采集工作（CmiS系统）。

（九）做好教工调出、退休工作。

（一零）做好离退休教师工作。

（一一）开展促进教师和谐发展，心理健康教育，建和谐校园的各项活动。

新建“教师论坛”（内部论坛）。增进教师间交流。

（一二）完成职称评审的准备工作。

三.档案工作

1.完成年鉴的整理工作；各口上交每月大事记；

2.完成上学年档案整理，个人档案交师大档案馆。

3.根据上级文件及各项检查要求、我校具体情况，逐步完善我校档案管理办法；

四.每月工作重点：

（一）.二月

1.制订计划；严格考核、考勤制度

2.老教师工作：活动费150元/人，64＋1人，交师大离退休处；

3.应聘教师试讲：应届毕业生；

4.新进教师的培训工作及继续教育工作；附件1：

5.教工调入：附件2：

6.2月26日，2001年、2002年年鉴交师大

7.2004年年鉴交海淀区教科所

8.工资管理：

休假人员：分部津贴、手机通讯费津贴

新调入教师工资、失业保险

平房取暖费

（二）.三月

1.法人证、组织机构代码年检；

2.劳动保障检查工作；

3.新进教师培训。

4.整理上年度、上学期档案：

5.工资管理工作：教师获奖奖金

6.医疗保险：外聘教师及临时工

7.3月20日前，2003年、2004年年鉴交师大

（三）.四月

1.转正工作：见附件3；

2.工资管理工作：失业保险、养老保险；

3.新进教师汇报课；

4.4月30日前核对历年年鉴清样；

5.组织国际联校学科评估活动。

（四）.五月

1.工资管理工作：住房公积金相关事宜。

2.新进教师培训。共2页,当前第1页1

3.人事聘任工作：见附件4。

（五）.六月

1.职评准备工作：条例；

2.转正工作；见附件3

3.教工考核工作；

4.新进教师汇报课、见习教师转正课；

5.学科带头人评定、认定工作。

（六）.七月

1.教工考核工作；

2.新进教师总结考核、见习教师转正工作；

3.人事聘任工作；

4.工资管理工作：教师获奖奖金统计；

5.工作总结；

6.年鉴（1-7月）；

7.教师退休工作；

8.职称评聘工作：宣传条例、表格（照片）。

 

 

 

 

一.附件1：新进教师的培训工作

1.本学期新进教师情况：

新进教师情况：原有9人；

其中，试用教师情况：原有6人：试用期满，准备调入5人,2005年4月试用期满1人。

见习教师3人。

2.新进教师培训：

（1）二月：上学期工作小结、本学期要求；

（2）三月：计算机a级考试；

（3）四月：汇报课

（4）五月：新进教师培训

（5）六月：汇报课

（6）七月：述职、总结会、转正会

二.附件2：教工调入

1.教研组长、主管领导意见：工作态度、表现、优点、需改进、建议

2.体检（师大校医院）、本人既往病史说明。

3.政审材料、住房情况调查表及住房情况证明。

4.商调函（师大人事处）。

5.查看档案（小学、师大人事处）：毕业证、学位证、转正定级、报道证、考核表、工资。

6.调令（师大人事处）。

7.对方单位出具：工资转移单、行政关系转移单、失业保险转移单。

8.填写教职工登记表、卡片（师大人事处盖章）。

9.档案送交师大档案馆。

10.确定工资、办理工资卡。

11.办理住房公积金。

三.附件3：转正工作

1.六月----七月：

转正工作1：见习教师；

转正工作2：试用教师。

2.工作步骤：

个人述职、总结：

教研组长、大组长、主管领导意见；工作态度、表现、优点、需改进、建议

转正登记表、转正工资定级表（师大人事处盖章）；

转正登记表送交师大档案馆；

办理工资卡、确定工资、住房公积金。

四.附件4：聘用教师工作程序

1.要求：

（1）学历：大本；英语：四级（应届）口语三级；

（2）身体健康：最近体检结果、本人既往病史说明。；

2.简历：聘用教师需提供资料：

（1）身份证及户口本（首页、户主页、本人页、变更页）（原件、复印件）；

（2）毕业证、学位证及复印件；

（3）教师资格证；

（4）计算机a级证；

（5）普通话等级证；

（6）英语口语登记证。

（7）获奖证书及复印件；

3.面谈

4.试讲

5.校务会初步讨论

6.体检：体检证明

7.详细个人情况：表格填全不空项

8.政审材料

9.心理测试

10.校务会确认；

11.确定工资。

转正考核鉴定表个人总结篇2

实习鉴定一、该生综合素质较好，爱岗敬业，工作能力强，有一定的工作组织能力，能和同事友好相处，短短实习工作期间，是个出色的教学能手，相信会在今后的工作中，取的出色的成绩。

实习鉴定二、同志于年月日起在我局实习，实习期为一个月。同志工作积极主动、高效，学习认真，待人诚恳，能够做到服从指挥、认真听取老同志的指导，不怕苦、不怕累，表现有较强的求知欲，积极观察、体验、思考，并能够灵活运用自己的知识解决工作中遇到的实

实习鉴定三、该学生实习期间工作认真，勤奋好学，踏实肯干，在工作中遇到不懂的地方，能够虚心向富有经验的前辈请教，善于思考，能够举一反三。对于别人提出的工作建议，可以虚心听取。在时间紧迫的情况下，加时加班完成任务。

能够将在学校所学的知识灵活应用到具体的工作中去，保质保量完成工作任务。同时，该学生严格遵守我公司的各项规章制度，实习期间，未曾出现过无故缺勤，迟到早退现象，并能与公司同事和睦相处，与其一同工作的员工都对该学生的表现予以肯定。

实习鉴定四、该生在实习期间勤奋认真,有很强的适应能力和创新意识,能够利用所学的知识迅速投入到实际的计算机应用程序编写当中,并能够结合自己的特点发挥优势弥补不足,在实习过程当中迅速的成长起来,不仅历练了自身,也为我单位带来了一股新风,受到合作伙伴的一致好评!

实习鉴定五、该生在实习期间热情、主动、积极。对事物保持高度的好奇与兴趣，虚心求教并勇於建言。随时调整自己，力求成长、尽善。积极争取

六、已完成实习规定的任务，实习报告符合标准，达到实习目的。勤奋好学,遵守厂规厂纪,带来先进管理理念.工作能力及专长在不断的社会实践中,自己以认真敬业,责任心强,工作效率高,执行公司指令坚决得到了各实习单位的认可。

鉴定评语（主要包括实习态度、遵守劳动纪律、业务能力强等方面情况）

在短短的实习期内，用他们的实际行动，给山庄全体工作人员留下了深刻的印象。

七、同学在我部实习期间，态度端正，学习踏实，工作认真，注重理论和实践相结合，将大学所学的课堂知识能有效地运用于实际工作中，在我部“重庆热线”实习时能创造性、建设性地并能独立开展工作；能吃苦耐劳，工作责任心强，注重团队合作，善于取长补短，虚心好学，具有一定的开拓和创新精神，接受新事物较快，涉猎面较宽，在计算机通讯领域不断地探索，有自己的思路和设想。

在实习期间，符合大学生实习的要

八、工作主动，踏实，肯干，和老师同事关系处理的很好，耐心学习不断的努力工作，以提高技术的自身，受到大家好评，望今后发扬成绩。

实习鉴定包含的主要内容

九、动手能力；、创新能力；、分析、解决实际问题能力；、协作与组织管理能力；、社会活动能力；、语言及文字表达能力。

工作鉴定意见十则（党员转正鉴定指导意见）

男，汉族，年月日出生，人，年月日入党，年月日参加工作。

同志于年月日被批准为中共预备党员。近一年来，该同志在组织的帮助下，通过自身的努力，不断充实和提高思想素质和工作业务水平，在各方面有了较大的进步。

思想上，该同志能以党员的标准来严格要求自我，树立正确的世界观、人生观和价值观，坚定共产主义理想和社会主义信念，拥护党的领导，坚持四项基本原则，坚持认真学习马列主义、思想、邓--理论和“三个代表”重要思想，用理论武装头脑来指导实践，坚持实事求是，与时俱进，不断提高自己的政治思想觉悟与理论水平，不断地探索与追求。

日常工作和学习上，该同志能牢固树立服务意识，注意加强个人素质和作风建设，充分发扬爱岗敬业精神，不怕苦，不怕累，勤于工作，勇于奉献；在工作中能虚心好学，踏实肯干，努力钻研业务知识，取得了一定的成绩；同时在工作之余不放松对专业技能的学习，不断充实完善自己。

生活上，该同志能严格遵守单位的管理制度和各项要求，培养自身良好作风的养成习惯，正确对待个人名利和待遇，不骄不躁，同事之间关系融洽。

希望该同志以后继续深入地学习政治理论知识，在工作中树立起全心全意为人民服务的思想，充分发挥党员的先锋模范作用，克服自身的缺点和不足，做一名合格的共产党员。

党支部

年月日

工作鉴定意见十则（年党员工作鉴定意见）

同志于年月由大学管理系本科毕业，分配来院从事秘书工作。三年来，该同志能坚持认真学习马列主义、思想、邓小平政论和“三个代表”重要思想，坚持实事求是，不断提高自己的政治思想觉悟与水平，不断地探索与追求。在年学院学生公寓辅导员紧缺时，主动请求担任公寓辅导员工作，体现了当代年青人的良好风尚。

自参加工作以来，充分利用自己所学知识，发挥其所长，踏实工作，不管是在学院搬迁过程中、学院教育教学合格评估，抗击“非典”等重要工作中，还是在日常的办公室管理工作，都能积极发挥主观能动性，虚心请教，很快能独立承担学院秘书工作。同时，担任学院团委工作。

正是由于自己的努力工作，在年度受到学院的表彰，考核表扬；年度被省教育厅评为全省教育信息工作者，被省文化厅评为文化信息网优秀信息员三等奖；年度，被评为省级文化系统优秀团员。年月，被学院党委吸收为中共预备党员。这都是其个人努力的结果，希望在以后的工作中，再接再厉，严格要求自己，不断求实创新，不断磨炼自己，取得更大的成绩。

工作鉴定意见十则（政府完善知识产权交易市场工作意见）

为贯彻落实《国家中长期科学和技术发展规划纲要（年）》、《国务院关于鼓励支持和引导个体私营等非公有制经济发展的若干意见》及配套政策有关精神，加快知识产权交易市场规范发展，国家发展改革委、财政部、科技部、国家工商总局、国家版权局、国家知识产权局研究提出以下意见：

一、指导思想、基本原则和总体目标

（一）指导思想

围绕提高企业自主创新能力，依托和发挥现有产权、技术产权和技术等要素市场的作用，发挥市场基础调节作用，加强政策引导和综合协调，推进知识产权交易市场的合理布局和功能多元化，完善交易规则与制度，引导专业中介组织参与交易活动，促进知识产权公开公正有序交易，形成有效的保护和监管体系，创新融资模式，拓宽融资渠道，促进中小企业又好又快发展。

（二）基本原则

一是坚持市场主导与政府推动相结合。充分发挥市场配置资源功能，加强政府引导和协调，促进各类知识产权成果通过市场进行转化，落实完善相关财税政策、实施有利的金融政策，鼓励企业自主创新和知识产权成果转化，形成政府推动与市场化发展的互动机制，推进知识产权交易市场体系的建设和发展。

二是坚持重点布局与协调发展相结合。充分利用已形成的产权、技术产权、技术市场等要素市场，根据区域经济发展水平和市场发育条件，逐步建立完善知识产权交易市场准入制度，重点布局带动力强、辐射面广的区域性知识产权交易市场，避免重复建设。协调多级产权、技术市场、技术产权等市场发展，促进技术、资本等要素跨区域流动。

三是坚持规范发展与探索创新相结合。建立健全知识产权交易机构行业组织和自律机制，遵循公开公平公正和诚实守信的原则，逐步建立完善政策法规体系。围绕交易市场发展过程中的关键问题和核心环节，鼓励有条件的区域进行交易模式、交易品种和体制机制的创新，实现交易品种的标准化。

四是坚持加快发展与合理监管相结合。抓住我国重大战略机遇期，加速建立与之相适应的知识产权交易市场体系的同时，加快建立有利于其发展的监管体制与监管模式，规范交易主体行为，维护其合法权益，保证交易市场正常秩序，形成知识产权保护的市场机制和社会环境。

（三）总体目标

通过政府引导和市场推动，逐步构建以重点区域知识产权交易市场为主导，各类分支交易市场为基础，专业知识产权市场为补充，各类专业中介组织广泛参与，与国际惯例接轨，布局合理，功能齐备，充满活力的多层次知识产权交易市场体系。

二、推进知识产权交易市场体系建设

（一）规范交易主体，提高交易质量。进场交易主体应具有完全民事行为能力的自然人、法人或其他经济组织。法人或其他经济组织在资金、评估、交易程序、运作方式、制度建设和专业人员配备等方面应具备相应的资质和水平，风险识别和防控能力较强。有条件的地区，要逐步建立交易主体信用制度，提高交易透明度与效率。

（二）丰富交易品种，创新交易方式。交易主要包含专利权、技术秘密、著作权及有关权、商标专用权、名称标记权、集成电路布图设计专有权、植物新品种等各类知识产权，具备条件的市场可交易以知识产权为主要载体的有限责任公司或未上市股份有限公司的股权等品种。交易可采取转让、许可使用、合资入股等方式。中小企业股权交易要按照《公司法》、《证券法》等法律法规。探索有利于企业股权流动、投资者便利进出的交易方式。

（三）建设交易市场，完备市场功能。有条件的地区，要逐步建立知识产权交易市场准入制度。知识产权交易市场应为各省（区、市）人民政府批准设立或认定并报相关业务主管部门备案的常设交易机构，可为事业法人或企业法人，其功能主要提供信息审核、信息、组织交易、交易鉴证、结算交割等服务。

交易市场应具备必要的交易场所，网络化的电子商务和信息服务平台，完善的交易系统及信息系统，较完善的交易制度、交易程序和规范的运作方式，按规定公开披露交易信息，并有明确的发展规划，拥有专业从业人员，满易活动需要。知识产权可在省（区、市）认定的产权交易中心登记托管。

（四）统筹安排，合理布局。知识产权交易市场在有条件的中心城市现有的技术交易市场、产权市场、技术产权交易市场、知识产权展示交易市场等基础上优化整合而成。积极推进专业化交易机构发展，逐步建立国家交易市场、区域性市场和专业化交易市场组成的多层次市场交易体系。

（五）整合资源，配套服务。根据知识产权交易需要和业务特点，交易机构可实行会员制，选择服务好、信誉高、能力强的交易中介为指定服务机构，进场从事交易服务。

三、规范知识产权交易行为

（一）严格交易程序，履行必要手续。程序主要涉及知识产权的真实性审查、价值评估、信息披露、竞价和撮合交易、合同鉴证与结算交割等。项目挂牌成交后，由转让双方签订合同并履行鉴证等相关手续。

（二）健全内部管理，建立信息披露制度。知识产权交易市场须建立健全交易规则及登记托管、结算交割、交易监督等规章制度，并报地方监管部门备案，接受管理和监督。项目披露应包括项目财务、经营管理、研发、人才储备、资金使用、价格评估、盈利分析及限制性条件等信息，由项目所有人选择评估、会计、律师事务所等专业机构、经纪会员委托。交易机构履行挂牌审核、信息内容认定和披露、交易方案确定和实施、交易主体和结算资金监管等职责，确保市场安全有序运行，保护交易参与者的合法权益。

（三）建立知识产权交易信息沟通反馈机制与运营网络。通过现代信息技术手段逐步建立参与知识产权交易主体的信用信息平台，完善交易市场信用信息数据库，促进企业自主知识产权信息互联互通。

四、改进知识产权交易配套服务

（一）促进知识产权交易市场的有序运行，推进政策法规、信用服务、融资担保、资格认证及相关中介服务的配套体系建设，加速科技成果转化，营造市场发展的良好环境。

（二）整合各类中介服务资源，积极发展技术中介、咨询、经纪、信息、知识产权和技术评估、风险（创业）投资、产权交易等中介服务机构，为知识产权顺畅交易提供支撑。逐步形成以知识产权交易机构为主，产权机构、会计师事务所、律师事务所、风险（创业）投资公司、资产评估机构等相配套的服务体系和协调机制。

（三）加强市场中介服务机构规范管理，提高执业水平和服务能力。通过政策法规、执业能力培训及多种形式业务交流，提高市场从业人员的专业素养和操作能力。培养一支多专业、懂法律、善经营的知识产权经纪人队伍，建立相应的考评制度。

五、加大政策扶持力度

（一）政府采取多种形式促进知识产权交易等市场发展，通过财税政策引导和鼓励交易市场或机构的信息平台与能力建设。

（二）建立适应知识产权交易的多元化、多渠道投融资机制。政策性银行按稳妥审慎原则，经批准应开展知识产权等的质押贷款业务。鼓励商业银行积极开展以拥有自主知识产权的中小企业为服务对象的信贷业务。支持和引导各类信用担保机构为知识产权交易提供担保服务，探索建立社会化知识产权权益担保机制。研究开展知识产权权益托管服务。

（三）加大创业投资对知识产权交易的支持力度。积极发展创业风险投资，发挥政府创业风险投资引导基金作用，引导和鼓励民间资本投入知识产权交易活动，符合规定的可享受创业投资机构的有关优惠政策。

（四）积极探索知识产权投融资新模式。拓宽风险（创业）投资退出渠道，经批准在发展较好的知识产权交易市场开展未上市高成长性中小企业股权流通的试点工作。

（五）国家鼓励不同形式的知识产权进场交易。政府财政性资金投入和支持的项目所形成的非关系到国家经济安全、国防安全和国家机密的知识产权应进场交易，促进民间资本投入所形成的和自然人所持有的知识产权进场交易。

六、加强领导和监督管理

（一）加强对知识产权交易市场的指导。各级政府要根据经济社会发展的需要，进一步改进工作方式，创新服务手段，加大指导与协调力度，及时交易信息，促进交易市场的规范发展。各地应结合实际，制定完善地方性知识产权交易市场的法规和配套政策，促进交易市场的制度化法制化。

（二）建立由国家发展改革委牵头，财政部、科技部、国家工商总局、国家版权局、国家知识产权局、国务院国资委、证监会等相关部门及部分省（区、市）级知识产权交易管理部门参加的指导委员会，加强对知识产权市场的指导和协调。依法建立和完善重大知识产权交易活动的审查制度。各业务主管部门要依法建立对知识产权等重大交易活动的特别审查机制，根据各自职能分工履行监管职责，加大知识产权保护力度。

（三）知识产权交易过程中，双方若出现争议，应协商解决，必要时依法采取纠纷调解、交易中止、撤销交易凭证、交易终止等措施解决，并及时向监管部门反映。对非法侵害知识产权、制销假冒产品和技术并造成重大损失的行为，要依法追究法律责任。

（四）国家和地方知识产权交易市场的监管部门，应依法实施管理，加强动态监管。通过年检方式，对交易不规范的机构予以警告并限期整改，对违反相关法律的机构依法予以中止、终止直至追究其法律责任。

（五）积极推进国家和区域性知识产权交易市场行业自律。切实发挥行业自律组织在自律维权、业务交流与合作、技术规范制定、管理咨询、业务培训、理论研究、对外合作等方面的作用，提高交易市场的整体效能与水平。

工作鉴定意见十则（年农村公路管理养护工作意见汇报）

各区、县人民政府，市级有关部门：

为加强和规范农村公路的养护管理，提高农村公路养护质量和投资效益，保障农村公路畅通，促进农村经济和社会发展，根据《中华人民共和国公路法》、《四川省〈中华人民共和国公路法〉实施办法》和四川省人民政府办公厅《关于农村公路管理养护体制改革的实施意见》（号）的有关规定，结合我市实际，制定本实施意见。

一、指导思想

（一）以邓小平理论、“三个代表”重要思想为指导，全面贯彻落实科学发展观，坚持农村公路建设、管理、养护并重的原则，明确各级政府对农村公路管理养护的责任，强化各级交通运输主管部门的管理养护职能，建立健全以政府投入为主的稳定的养护资金渠道，加快公路养护市场化进程，促进农村公路持续健康发展。

二、明确职责，建立健全农村公路管理养护体制

（二）区、县政府是农村公路管理养护的责任主体，负责贯彻执行农村公路养护管理的政策法规，筹集和落实农村公路管理养护资金，监督公路管理机构的管理养护工作，组织协调乡（镇）人民政府和有关部门做好农村公路管理养护。

乡（镇）人民政府在县级人民政府确定的职责范围内，并在交通主管部门的指导下，落实机构和人员负责乡道的管理养护工作，协调、指导村道的日常养护工作；

村民委员会在县级、乡（镇）人民政府及交通主管部门帮助下，做好本村村道日常养护的组织实施工作。

（三）市交通运输行政主管部门负责全市农村公路养护管理的行业管理工作。其所属的公路管理机构具体组织贯彻落实农村公路养护管理的政策法规，实施农村公路养护发展规划和年度计划，监督、检查、考核农村公路养护资金使用及养护质量，推进农村公路养护技术进步，指导农村公路养护管理体制改革。

区、县交通运输行政主管部门具体负责本地区农村公路养护管理，监督所属公路管理机构的养护管理工作，组织协调农村公路养护管理体制改革。其所属的公路管理机构具体承担县道的日常养护管理工作，指导乡道、村道的日常养护管理工作；负责编制农村公路养护建议性计划并按照批准的计划组织实施，指导养护工程的招投标以及通过其他竞争方式确定养护工程承包人，对养护质量进行检查验收。

三、稳定资金投入，加强资金管理

（四）各区、县人民政府应根据农村公路养护的实际需要，统筹本级财政预算，筹集和安排必要的资金用于农村公路正常养护。要积极争取上级财政的支持，提高财政保障水平。

村道日常养护经费由村民委员会根据村民自治的原则，采取“一事一议”和订立村规民约的办法多渠道妥善解决。各级财政根据村民筹资筹劳情况给予适当奖励补助。村民委员会筹集村道建设、养护资金，应当遵循村民自愿、量力而行的原则，并按照有关法律法规的规定办理。

（五）加强农村公路养护资金的管理和监督。各区、县财政要建立农村公路养护资金专帐核算，确保专款专用。审计、财政和交通部门要定期对用于农村公路养护资金的使用情况进行审计，确保资金有效、安全使用。

四、推进公路养护市场化，提高养护效率和质量

（六）各区、县人民政府要积极探索适合本地实际的农村公路管理养护机制，稳步推进农村公路管理养护市场化，逐步建立合理的农村公路管养机制。对路面等级较高、技术难度较大的农村公路养护，可通过竞标等方式，选择有一定资质的单位养护。对等级较低、自然条件特殊等难以通过市场化养护运作的农村公路可实行建设、改造和养护一体化招标，也可采取个人（农户）分段承包等多种方式进行养护。

（七）农村公路养护应按照有关公路养护技术规定和操作规程进行，保持道路及设施完好，行车通畅。应逐步完善公路交通安全设施，规范设置警告、禁令、指示和指路标志，并对标志标线定期保养，及时修缮。

县道、乡道因养护确需中断交通的，应当报县级以上人民政府交通主管部门同意，并采取必要形式提前向社会公告；村道养护确需中断交通的，应当报告村民委员会并告知村民。短时间内难以修复的，应修建临时便桥、便道或指明绕行路线。

（八）养护作业单位应根据本地实际和公路养护特点，建立养护安全生产管理制度，加强安全教育与管理，督促养护人员严格执行安全操作规程，并实施工伤保险。

（九）县、乡人民政府和村民委员会应当按照绿化规划和谁种植、谁管理、谁受益的原则，组织和发动农村公路沿线的单位和个人实施公路绿化。

（十）市、县两级交通运输行政主管部门及其公路管理机构要按照标准统一、内容完备、结构合理、数据准确、上下衔接的原则，建立健全农村公路管理养护数据库，完善农村公路管理养护信息系统，适时、准确地反映农村公路技术等级、路面结构、配套设施、养护投入、路况质量、路产路权等信息，为农村公路管理养护提供技术支持和决策服务。

五、加强路政和应急管理，确保公路畅通安全

（十一）区、县人民政府及其交通运输行政主管部门应当认真履行职责，依法做好农村公路路政管理工作，保障公路的完好、安全和畅通。

区、县交通运输行政主管部门主管本行政区域内县道、乡道的公路路政管理工作，其所属的公路管理机构负责具体实施县道、乡道的公路路政管理工作并指导村道公路的路政管理工作。

乡镇人民政府和村民委员会负责村道的路产路权保护，可委托县级公路管理机构实施路政管理。

（十二）区、县交通运输行政主管部门应加强农村公路应急管理体系建设，制定农村公路突发事件应急预案，建立公路突发事件应急救援队伍，并配备必要的应急救援物资、设备和设施。

区、县交通公路管理机构要根据本地公路状况，分析掌握路段、桥涵的抗灾能力，做好必要的预防措施和监控预警，一旦发生自然灾害，要在当地人民政府统一组织下，组织力量积极抢修，及时恢复、保证公路的正常通行。

六、加强监督检查，确保责任落实

（十三）市交通运输行政主管部门和公路管理机构应建立农村公路养护管理的检查、考核机制，加强对区、县农村公路养护管理的督办检查。区、县人民政府应当认真履行职责，采取有力措施，依法做好农村公路养护和管理工作。区、县交通运输行政主管部门应加强对辖区内农村公路养护管理的检查督促，组织相关部门对年度计划执行情况、养护质量进行定期检查考核评定，保证农村公路养护管理工作正常有序。

工作鉴定意见十则（在公司实践的工作鉴定意见通用版）

同志自去年毕业开始在信息系统（中国）有限公司实践。在我单位见习期间，能够严格遵守并执行公司的各项规章制度，能够积极主动的配合其他相邻工作同仁协调完成各种工作任务。认真学习业务知识，在很短的时间内就掌握了工作的要点和技巧，并将其合理的运用到工作中去。能够积极主动的向老员工学习，弥补自己的不足。工作积极主动，学习认真，尊敬他人，待人诚恳，能够做到服从指挥，团结同事，不怕苦，不怕累。并能够灵活运用所学的计算机专业知识解决工作中遇到的实际困难。一年来理论水平及操作技能均有很大程度的提高。在见习期间得到领导和同事们的一致好评。

实践工作期间，是个出色的教学能手，相信会在今后的工作中，取的出色的成绩。

同志工作积极主动、高效，学习认真，待人诚恳，能够做到服从指挥、认真听取老同志的指导，不怕苦、不怕累，表现有较强的求知欲，积极观察、体验、思考，并能够灵活运用自己的知识解决工作中遇到的实际问题。

实践期间工作认真，勤奋好学，踏实肯干，在工作中遇到不懂的地方，能够虚心向富有经验的前辈请教，善于思考，能够举一反三。对于别人提出的工作建议，可以虚心听取。在时间紧迫的情况下，加时加班完成任务。能够将在学校所学的知识灵活应用到具体的工作中去，保质保量完成工作任务。同时，该学生严格遵守我公司的各项规章制度，实践期间，未曾出现过无故缺勤，迟到早退现象，并能与公司同事和睦相处，与其一同工作的员工都对该学生的表现予以肯定。

实践期间勤奋认真,有很强的适应能力和创新意识,能够利用所学的知识迅速投入到实际的计算机应用程序编写当中,并能够结合自己的特点发挥优势弥补不足,在实践过程当中迅速的成长起来,不仅历练了自身,也为我单位带来了一股新风,受到合作伙伴的一致好评!

同志在实践期间、热情、主动、积极。对事物保持高度的好奇与兴趣，虚心求教并勇于建言。随时调整自己，力求成长、尽善。积极争取实践规定的任务，实践报告符合标准，达到实践目的。实践单位鉴定意见勤奋好学,遵守厂规厂纪,带来先进管理理念.工作能力及专长在不断的社会实践中,自己以认真敬业,责任心强,工作效率高,执行公司指令坚决得到了各实践单位的认可。

实践实践期间工作认真，勤奋好学，踏实肯干，虚心好学。善于思考，能够举一反三。。能够将在学校所学的知识灵活应用到具体的工作中去，保质保量完成工作任务。同时，该学生严格遵守我公司的各项规章制度，实践期间，未曾出现过无故缺勤，迟到早退现象，并能与公司同事和睦相处，与其一同工作的员工都对该学生的表现予以肯定。

实践期间，态度端正，学习踏实，工作认真，注重理论和实践相结合，将大学所学的课堂知识能有效地运用于实际工作中，在我部“重庆热线”实践时能创造性、建设性地并能独立开展工作.能吃苦耐劳，工作责任心强，注重团队合作，善于取长补短，虚心好学，具有一定的开拓和创新精神，接受新事物较快，涉猎面较宽，在计算机通讯领域不断地探索，有自己的思路和设想。

工作鉴定意见十则（第四阶段教育总结评议建章立制指导意见）

各中小学、幼儿园、县直教育单位：

根据县委[发（）4号]和县教育局[发（）19号]《通知》要求，现将西乡县教育系统干部教师作风教育整顿第四阶段总结评议建章立制工作作出安排意见如下：

一、第四阶段的主要工作任务

第四阶段（）的主要任务是：总结评议、建章立制。具体完成三项工作任务：

（一）开展干部教师作风评议。在县上整顿活动结束前，对中小学、幼儿园、县直教育单位、教育局机关开展作风教育整顿情况进行群众满意度测评；测评结果作为考核评价领导班子、领导成员、干部教师及学校目标责任书考核的重要内容，记入领导班子、领导成员、干部教师的档案，并在一定范围内公布。凡是测评结果排名靠后，属单位的给予主要负责人实施警示训诫谈话，属个人的给予责令限期进行整改；对群众反映强烈的问题，给予严肃查处。

教育局机关、学校、幼儿园、县直教育单位写出本单位作风教育整顿工作总结，领导成员、干部教师写出个人作风整顿工作总结。

（二）明确岗位职责。教育系统各单位都要结合本职工作，按照本职职位、廉政高效、简便易行、利于考核相统一和责权利相一致的原则，对本单位每个干部教师的岗位、所承担的工作内容、工作标准及程序进行梳理完善，规范工作流程；合理确定学校班子、党政工团队组织、领导成员、股（处）室（组）和各个工作人员的工作内容、岗位职责、工作标准、行为规则、考核方式、奖惩措施，予以公示，作为群众监督和单位考核的依据。

（三）健全完善各类规章制度。教育局机关、学校、幼儿园、县直教育单位，要结合作风建设的需求，对本单位各类规章制度进行一次清理和梳理，做好陈旧制度废止和充实修订新建。要健全校务委员会民主集中、科学决策的集体会议决策制度；要健全学习、师德师风教育考核、考勤、教育目标管理、奖励性绩效工资考核发放等常规性制度；要健全财务管理、校务公开、网络管理、疫病防控管理、安全稳定管理、食堂食品卫生安全管理、住宿生管理等方面的管理制度；要健全接待、首问负责、服务承诺、限时办结等效能建设制度；要健全重大事项报告、述廉述效、诫勉谈话、工作质询、经济责任审计、工程建设监督管理、民主评议和教代会等监督制度；要健全干部考察、培养考核、选拔任用等干部选拔任用制度等等。要按照远近结合、标本兼治的要求，坚持解决问题与建章立制并举，着眼于长效机制建设，建立健全干部教师作风教育、监督、惩处等各项规章制度，努力把行之有效的措施转化为长期坚持的治本之策，促进干部教师教育管理制度化、规范化。

二、第四阶段的工作要求

（一）作风评议的操作要求。

⑴各单位要提前写出本单位作风教育整顿工作总结，印制好作风评议表，确定好会议时间，邀请乡镇（社区）领导代表、教育局包抓领导、督导小组人员、人大代表、政协委员代表、党员代表、教师代表、家长代表、学生及其它代表。

⑵召开“学校领导班子及领导干部作风教育整顿总结评议大会”。议程为：学校领导班子汇报作风整顿工作，与会人发言评议，下发评议表，无记名填表，收表统计，宣布评议结果，宣读有关制度，会议总结表态。

⑶会议对领导班子、领导成员和干部教师的满意、基本满意、不满意作出评议，鉴定为优秀、良好、一般、较差4个等次，并在本单位适当范围公布。⑷填报单位领导班子、领导成员、干部教师作风教育整顿鉴定档案表。

（二）明确岗位职责的操作要求。

⑴组织清理、梳理原有的岗位职责，作出必要的充实修订或调整更新。

⑵针对规范办学管理的要求，结合学校奖励性绩效工资分配发放的实际，对单位领导班子、党政工团队组织、股（处）室（组）、领导成员（含九年制、中心校业务管理、职成教管理干部和会计）、干部教师，做好调研，集体研究，合理确定：内设机构设置、定人员、定职数、定岗位（管理、班主任、教学、辅助岗位）、定工作量（含动态工作量）、定工作内容、定岗位职责、定工作标准、定行为规则、定考核方式、定奖惩措施，定绩效奖励性工资分配发放办法，并予公示，编制出《学校内设机构及各类工作岗位职责管理考核实施意见汇编》。

（三）建章立制的操作要求。

⑴组织清理、梳理原有各类规章制度，作出必要的充实修订或调整新建，做到简便实用、约束力强、可操作、可考核。

⑵编制出《学校规章制度汇编》。新

（四）上报材料的要求。第四阶段需要上报：

⑴领导班子、领导成员、干部教师作风评议统计汇总表1份。

⑵本单位作风教育整顿总结评议大会召开情况的报告1份，附会议记录复印件1份。

⑶领导班子、领导成员、干部教师作风教育整顿鉴定档案表各1份。

⑷第四阶段作风整顿工作小结1份。

⑸作风整顿“三种”统计表、办实事办好事典型事例。

⑹《学校内设机构及各类工作岗位职责管理考核实施意见汇编》1套。

⑺《学校规章制度汇编》1套。

⑻“学校干部教师作风教育整顿工作总结”1份。

以上8类材料报表，一律采用a4纸质、标题2号黑体、正文3号宋体或仿宋，于月日前上报教育系统整顿办。

（五）加强组织领导的工作要求。总结评议、建章立制，是第四阶段的最为重要的任务，而且面临备战中考高考和安全维稳工作，时间紧，任务重，丝毫不可懈怠。教育系统的所有单位领导，要加强宣传，精心组织，周密部署，两手抓两手硬、两不误两促进，扎实推进作风建设上台阶，圆满完成教育教学各项任务，用作风整顿的实效检验教育教学管理提高的成效，为县域教育率先突破发展做出更大的贡献。

工作鉴定意见十则（烟草行业技能鉴定意见）

一、加大宣传力度，发挥导向作用

要以网络、报纸、杂志等为媒介，努力做好政策宣传、动态介绍、信息交流等工作。加强鉴定信息员队伍建设，严格管理和考核。鉴定站定期通报报送信息的数量和质量，并作为鉴定站年检考核内容之一。要以宣传推广鉴定工作典型经验，表彰鉴定先进单位和个人为主要形式，在行业内形成尊重技能人才，重视职业技能培训与鉴定的氛围，为高技能人才的成长创造良好的舆论基础。

二、完善鉴定管理体系，提高鉴定质量控制水平

加强制度建设，规范内部管理。加强鉴定站内部基础管理是推动鉴定工作正常开展、保证鉴定质量的重要环节。鉴定站要注重自身建设，不断提高管理人员业务水平，完善财务、档案等管理制度。要坚持鉴定站年检和工作评估制度，做好年度年检工作，并高标准地提出年度鉴定站年检标准和工作要求。同时，加强职业技能鉴定各工作环节的规范化运作，为全面建立职业技能鉴定质量保证体系奠定基础。

强化质量控制，完善督导制度。省级局（公司）人劳部门及鉴定站，要坚持公开、公正、合理的原则，加强鉴定实施过程中各环节的质量控制，严格工作程序。要建立和完善职业技能鉴定两级督导制度，并落实到位。鉴定站要强化鉴定过程中自我监督检查和接受监督检查的职能，尤其在实施高级技能鉴定和统考职业的鉴定过程中，必须做到督导员现场督考。要进一步完善现场督考和质量抽查相结合的督导功能，鉴定站要深入企业进行现场督导，并加强对日常鉴定工作的指导和质量抽查。国家局鉴定中心将定期和不定期地组织全行业的质量抽查工作。

不断开拓创新，规范鉴定行为。在职业技能鉴定实践过程中，要妥善解决好培训、鉴定与生产经营的关系、鉴定投入与经济效益的关系。作为政策性和技术性很强的鉴定工作，要切实改变落后的鉴定手段和因人因地降低鉴定标准的做法，统一鉴定工作标准。要在鉴定方式、鉴定手段和证书管理等方面，积极运用高新技术和现代化手段，使鉴定工作更加科学规范，使鉴定行为更加客观公正。

三、拓展鉴定范围，突出重点职业，积极推进高技能人才培训与鉴定工作

要根据企业及职工需求，遵循质量和数量并重的原则，拓展鉴定工作领域，扩大鉴定范围，从整体上推进所属工、农、商企业的鉴定工作。工业鉴定工作的重点是全面实行职业资格证书制度，加大高级技能职业技能培训与鉴定的力度；农业鉴定工作的重点是加大职业技能培训与鉴定的覆盖面，提高烟叶分级工高及技能培训与鉴定的比重；商业鉴定工作的重点是以卷烟商品营销员职业技能培训与鉴定为核心，按照统一标准、材、统一命题、统一考务和统一证书的原则，规范鉴定报名、实施鉴定现场控制、答题卡管理以及鉴定数据分析等环节的管理程序，全面提升鉴定质量。

加强烟草行业高技能人才培养，推进全行业技师鉴定工作，是今年国家局（总公司）工作的重点之一。主要任务是：全面开展烟机设备修理技师的培训与鉴定，进行烟机设备高级修理技师鉴定试点工作；探索烟叶分级技师培训与鉴定模式，并进行试点；研究部署卷烟商品营销师职业资格全国统一鉴定试点工作，如具备条件年底前开展一次试点工作。

国家局鉴定中心将根据行业经济发展和企业的需求，总结以往考核标准、模式、方法和范围等方面的经验，进一步完善技师鉴定的技能题库，提高技师技能鉴定的质量，充分发挥技师鉴定在整个职业技能培训与鉴定工作中的导向作用。

四、加快职业标准、鉴定指南、培训教材的开发，完善题库建设

国家局（总公司）负责组织全行业职业标准、鉴定指南和培训教材的开发，领导职业技能鉴定题库建设，组建专业专家队伍等项工作。国家局鉴定中心负责具体实施上述各项工作。

加快题库建设是国家局鉴定中心今年的重点工作。要依靠企业、教育培训部门的力量，充分利用烟草学校的各种资源，借鉴先进的开发技术，有计划、有组织、高质量、高效率地开展题库建设，全面推进模块化鉴定方式，满足全面开展鉴定工作的需要。今年题库建设以烟叶分级工和烟叶调制工题库开发为中心，建立烟机设备高级修理技师鉴定理论题库，落实制丝修理技师、滤棒成型修理技师题库开发工作，扩充包装修理技师、卷接修理技师的题库数量，提高和完善卷烟商品营销员题库质量。按照劳动保障部对鉴定工作的要求，进一步提升题库质量，逐步对现有各职业（工种）的题库进行梳理、补充和完善，逐步建立起符合国家题库要求、具有烟草行业特色、以提高职业技能为核心、以模块集合为特征的知识和技能题库。

五、建立健全职业技能鉴定工作网络，加强鉴定信息的分析、汇总和整理工作

建立健全烟草行业职业技能鉴定工作网络，充分利用信息资源，加速信息传递工作。进一步做好鉴定需求、鉴定实施、鉴定结果和鉴定质量控制等鉴定信息的分析、汇总和整理工作。总结鉴定工作的经验，探索鉴定管理、鉴定模式、考评技术等方面的新模式、新思路，在全行业进行推广。

六、加强队伍建设，提高工作水平

进一步加强职业技能鉴定管理人员、考评人员、信息员和专家四支队伍的建设，通过制度化培训，对四支队伍进行新理论、新知识、新技术等内容的培训，全面提升其政治素质和业务素质。同时，四支队伍要全面实行聘用制，完善培训、使用、考核、奖励相结合的制度，对优秀人员进行表彰奖励，对不合格者进行淘汰。按照劳动保障部有关规定，考评人员全部实行聘用制、轮换制和派遣制。今年国家局鉴定中心将举办信息员、考评员和高级考评员培训班。

各省级局（公司）人劳部门及鉴定站，要按照本意见，结合实际，确定今年的工作目标，并采取有效措施，真正做到从实际出发，脚踏实地地抓好各项鉴定工作的贯彻落实，开创鉴定工作的新局面。

工作鉴定意见十则（汉语拼音教学部分测评意见）

一、测评对象使用“义务教育课程标准实验教科书”的一年级学生。

二、测评时间汉语拼音部分教学结束之后。

三、测评内容

（一）测评学生能否准确地拼读汉语拼音音节。

（二）测评学生能否准确地认读教材中汉语拼音部分要求认识的生字。

四、测评方法

（一）测试方法

1．拼读音节的测试方法。

（1）使用四年级以上各册语文教科书后的生字表，让学生认读生字上的音节。

（2）可以从生字表中的任何一行开始让学生认读。认读50个音节，统计认读的正确率。

（3）学生拼读时，教师不催促，不作提示，只对读错的音节做上记号。如果学生开始拼错，后又自行纠正，应视为正确。

（4）测试个别进行。可由教师进行测试，也可培训几个高年级学生帮助测试。

（5）测试开始时的指导语：“请你从这一行开始拼读生字上的拼音，要看清楚，读正确。”

2．生字的测试方法。

（1）用汉语拼音部分所学生字组成的句子让学生认读。提供两套测试卷供教师选用。

（2）每套测试卷含汉语拼音部分所学的50个生字，少数几个未学过的字加注了拼音。学生认读时教师不催促，不作提示，只对读错的字做上记号，学生开始读错，后又自行纠正，应视为正确。加注拼音的字学生如果读错不必作记号。

（3）测试个别进行。可由教师进行测试，也可培训几个高年级学生帮助测试。

（4）测试开始时的指导语：“请你准备一下，把这几个句子读一读，要看清楚，读正确。”

（二）评价方法

1．拼读音节方法和认读生字均为50个。对学生的测试成绩以给“星”的方法进行评价。

50个全部读对，给5颗星。

读错1-5个，给4颗星。

读错6-10个，给3颗星。

读错11-15个，给2颗星。

读错16-20个，给1颗星。

读错21个以上，暂不给星。

2．鼓励成绩不够理想的学生针对自己的薄弱环节进行复习。可根据他们自己选定的时间再作测试，有进步就给加“星”。

五、统计分析

测评的主要目的是为了检验和改进学生的语文学习和教师的教学。测评后可以从两个方面进行统计分析。

（一）对学生个人学习情况进行记载和分析，作为学生语文学习情况的档案资料。

（二）对全班学习情况进行统计和分析，找出成功之处和薄弱环节，及时采取补救措施，并改进和完善以后的教学。

工作鉴定意见十则（矿度思想政治工作安排意见）

矿属各支部总支：

根据中煤政研会、省煤政研会年工作要点和集团公司党委会议精神，结合我矿职工思想政治研究会的工作实际，及集团公司职工思想政治工作研究会的指导思想，坚持以思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想为指导，认真学习、宣传、贯彻党的十六届四中全会精神，紧紧围绕公司全年奋斗目标，切实加强和改进思想政治工作，与时俱进，开拓创新，针对企业改革发展的实际，大力开展形式多样的思想政治研究会活动，把思想政治工作融入企业的安全生产，经营管理等各项工作中去，努力开拓思路，提出新的举措，不断开创政研会工作的新局面。

根据这一指导思想，现将我矿职工思想政治工作研究会年的工作安排如下：

一、认真学习贯彻党的十六届四中全会精神，以十六届四中全会精神统揽政研工作全局

1、切实把学习贯彻届四中全会精神做为当前的首要任务，围绕加强党的执政能力建设这一主题，把握灵魂，领会实质，深刻认识新阶段我们党举什么旗，走什么路，实现什么目标。要用届四中全会精神统一广大干部职工的思想和行动，努力提高对“三个代表”重要思想的认识，深刻把握“三个代表”重要思想的内涵和根本要求。贯彻“三个代表”重要思想，关键在坚持与时俱进，核心在坚持党的先进性，本质在坚持执政为民，要把广大干部职工的思想，统一到届四中全会精神上来，把智慧和力量凝聚到完成集团公司确定的“年百亿，跨越发展”的工作任务上来，不断增强贯彻十六届四中全会精神的自觉性和坚定性，增强贯彻“三个代表”的自觉性和坚定性。

2、大力弘扬马克思主义学风，坚持理论联系实际，努力用“三个代表”重要思想和十六届四中全会精神指导实践，解决问题，推动工作，要抓住“第一要务”，牢牢铭记“两个务必”，深刻理解“三个代表”，不断总结贯彻十六届四中全会精神的新经验，开拓新的领域。切实把学习贯彻“三个代表”重要思想和十六届四中全会精神的收获转变为推动政研会工作的动力和良策，把学习到的知识和经验转化为做好政研会工作的智慧和力量。

二、选准课题，突击重点，搞好调查研究，为矿领导决策提供可靠的依据和参考。今年我矿政研会调查研究的重点课题是：

1如何加强党的执政能力建设。

2在实施“六大工程”活动中的具体体会和经验。

3在转换机制，建立现代企业制度过程中，如何调整建立，形成思想政治工作新体制和新机制。

4如何充分发挥党组织的政治核心作用，深入开展“两比三争”活动。

5了解矿区文化建设的现状，存在问题及经验，探讨企业文化建设的新路子。

6下岗、困难职工等弱势群体现状调查。

7如何落实全心全意依靠工人阶级办企业的方针。

8构建学习型组织全面提升广大党员干部的整体素质，保持共产党员的先进性。

9在开展“春风进万家”活动中的具体体会和经验。

10如何做好企业改制过程中职工思想政治工作。

三、加强政研会自身建设，努力培养造就一支富于创新、勇于开拓、善打硬仗的政研干部队伍。

1、认真抓好政研会自身的学习，努力提高自身业务素质。全体政研干部要认真学习学习马列主义、思想邓小平理论和“三个代表”重要思想，不断提高自身业务素质、理论水平和政治素养。

2、认真抓好政研会组织建设。要及时调整政研会领导成员，配备专职或兼职政工干部从事政研会工作，并将调整情况上报矿政研会备案。

转正考核鉴定表个人总结篇3

我国职业技能鉴定的历史发展

我国现行的职业技能鉴定制度是在工人技术等级考核制度基础上逐步建立和发展起来的。建国以来，为适应不同历史阶段的需要，我国工人考核制度不断调整、充实和完善，大致经历了四个阶段的逐步发展和演变，最终形成了现行的国家职业技能鉴定制度。

初创阶段（1949-1977年）

新中国成立后，党和政府在大力开展经济建设的初始便高度重视职工队伍，尤其是技术工人队伍的建设。为解决失业人员的就业和不合理的工资分配制度问题，国家劳动部门大力开展了职工就业、转业培训，并着手建立新型工资分配制度，同时特别注重建立与之相适应的工人技术等级考核制度。学徒工的转正等级考核，可视为我国职业技能考核鉴定制度的雏型。

1956年

总理签发《国务院关于工资改革的决定》，要求全国按产业、部门逐步建立起涉及上万工种的技术等级标准，并开始全面推行考工定级和考工晋级制度。同时规定了技术等级的数目（通常八级，或在八级之内）以及各等级的技术要求。

1963年

技术等级标准被第一次全面修订，根据生产技术的发展，进行调整、增加，整个技术标准的水平有了提高。这些制度与标准的制定与完善，不但成为考核职工技术水平的尺度、确定职工工资标准的依据，而且成为企业定额管理和职业技术培训的基础。时期，工人技术等级考核工作陷入瘫痪，直到1978年之后才得到扭转。

恢复阶段

（1978-1987年）

1979年

原国家经委和国家劳动总局联合发出了《关于进一步搞好技工培训工作的通知》，要求为使职工队伍的技术技能水平适应生产发展和技术进步的需要，劳动部门应采取多种形式进行培训。

1983年

原劳动人事部颁布《工人技术等级考核暂行条例（试行）》，对工人的培训和考核作出制度性规定，标志着工人技术等级考核制度得以确定。

1985年

《中共中央关于教育体制改革的决定》明确指出：“一切从业人员，必须取得考核合格证书才能走上工作岗位。有关部门应该制定法规，逐步实行这种制度。”文件为我国工人技术等级制度的进一步充实、发展指明了方向。

调整充实阶段（1988-1991年）

这一时期，我国专业技术技能型职工队伍建设开始加速。调整充实阶段完成了三项重要工作：

一是全面修订了全国技术等级标准。原劳动部组织国务院45个行业主管部门进行了第三次技术等级标准的修订工作。此次修订工作历时3年，初步解决了部门间工种交叉重复的问题，将近万个工种合并到4700多个，并颁布了我国首部《中华人民共和国工种分类目录》。

二是建立和完善了技师评聘制度。1986年原国家经委对企业高级工培养问题作了专题调查，中央和国务院领导明确指示要尽快恢复和完善考工晋级制度、恢复技师制度，举办全国技术比赛，提高工人社会地位，保障和促进高级生产技术人才的培养。

三是颁布了《工人考核条例》。1990年，原劳动部颁布实施《工人考核条例》，规定了国家实行工人考核制度，把培训、考核与使用、待遇结合起来，并对考核种类、方法、依据、组织管理、证书核发及处罚等作了较为详尽的规定。在这一阶段，我国初步形成了国家工人考核管理体系和工人初、中、高级技术等级及技师、高级技师职务考核晋升体系，在全国统一了证书式样和发放的管理，初步建立了国家技术等级、技师资格证书制度，为我国工人考核制度的发展，建立职业资格证书制度的形成奠定了基础。

转轨阶段（1992年-现在）

1993年

党的十四届三中全会通过《中共中央关于建立社会主义市场经济体制若干问题的决定》，文件中首次提出“要制定各种职业的资格标准和录用标准，实行学历文凭和职业资格证书两种证书制度”。技术等级考核制度被赋予了新的内涵和更高要求。工人技术考核制度开始向国家职业资格证书制度和职业技能鉴定制度转轨，以原劳动部制定颁布的《职业技能鉴定规定》、原劳动部、人事部联合颁布的《职业资格证书规定》及《劳动法》、《职业教育法》等法律、法规为基础，完成了职业技能鉴定的理论架构。这些法律法规和文件的出台促进了各种考核鉴定的进步与完善，对规范职业技能鉴定工作程序，建立和完善职业技能鉴定的质量保证体系发挥了重要的指导作用。

我国电力行业职业技能鉴定现状

开展职业技能鉴定，推行职业资格证书制度是深化电力体制改革，建立现代企业制度，创建一流企业，加快与国际接轨的必然要求。1998年，电力行业职业技能鉴定指导中心正式组建。1999年，原劳动和社会保障部公布了66个实行国家控制准入的职业，电力作为自动化程度较高、技术密集型的行业，其88个特有工种与劳动和社会保障部公布实行准入的职业一并实行职业资格准入制度。2000年，电力行业职业技能鉴定工作全面开展。十几年来，电力行业的职业技能鉴定工作取得了巨大成绩，鉴定规模逐年扩大，鉴定范围逐年增加，高技能人才评价工作步伐加快，技术能手评选和技能竞赛活动效果明显，职业技能鉴定形成了品牌，为推动电力行业健康发展做出了突出贡献。

强化思想认识，促进鉴定工作健康有序进行

电力行业职业技能鉴定指导中心站在行业整体发展的高度，大力宣传开展职业技能鉴定，推行职业资格证书制度的重要性和必要性，形成了职业技能鉴定工作在行业深入人心的良好氛围。指导中心每年组织召开全行业的职业技能鉴定工作会，全面总结经验，认真部署下一阶段工作，积极推进电力行业职业技能鉴定工作有序快速发展。广大电力企业对鉴定工作高度认可与支持，广大电力职工积极参与。截至2012年底，电力行业累计鉴定216万人次，150万人次取得职业资格证书，通过率为69.44%左右。各级电力企业高度重视职业技能鉴定工作，加强高技能人才队伍建设，将职业技能鉴定同企业的人力资源管理有效结合，逐步建立了培养、鉴定、选拔、评价、使用相结合的技能人才激励机制，激发和调动了员工自觉学习技术、钻研业务，提高职业技能水平的积极性，从而促进了企业的科学发展。“电力行业的职业技能鉴定工作基础扎实、运作规范、激励机制已经建立”，电力行业职业技能鉴定工作得到了国家人力资源和社会保障部主管领导的充分肯定。

强化组织保障，建立健全鉴定工作管理体制

建立了完整、统一、运转高效的行业指导中心——发电集团、网省电力公司鉴定中心——鉴定站的职业技能鉴定三级管理体系。截至目前，行业共成立了49个鉴定中心和257个职业技能鉴定站，鉴定范围涵盖了全国31个省市自治区的电力企业。各级鉴定机构均配备了专兼职相结合的工作人员队伍，为技能鉴定的全面展开提供了可靠的组织保证。

鉴定工作规章制度日臻完备。电力行业职业技能鉴定指导中心在鉴定机构管理、证书核发、考务管理、能手评选、质量管理和督导巡视、高级技师鉴定评审、技能竞赛等方面制定了有关规章制度。各级鉴定机构根据指导中心的要求也制定了详尽、配套的实施工作细则，为鉴定工作的规范运作提供了完备的制度保证。

强化基础建设，逐步实现题库资源全行业共享

完成了36个电力特有职业（工种）国家职业技能标准、95个职业（工种）鉴定规范和103个职业（工种）国家题库电力行业分库的建设工作，组织开发了试题库管理系统和技能鉴定管理系统软件，并启动了网络考试的试点工作。按照国家有关规定要求，积极推动职业技能鉴定补充命题工作，逐步加大鉴定机构补充命题试题资源上报汇总审核工作力度，最大限度地实现鉴定资源共享。同时，根据工作开展情况、新技术发展要求以及企业岗位设置变动情况，及时开展国家职业技能标准和部分职业（工种）题库的修订工作，实现了题库资源的常态管理和滚动开发。

强化评价创新，不断提高技能鉴定考核的科学性

在理论知识考核上，充分利用信息技术的发展，在试点的基础上逐步推行计算机网络考试，实行机考和笔试相结合，提高了鉴定评价的客观性和科学性；在技能操作考核上，逐步推行模块化考试方式，紧密结合企业生产实际和技术设备发展要求，坚持共性考核与个性考核的有机结合，增强技能操作考核的灵活性和针对性，提高了技能操作考核的整体质量与水平；在高技能人才的鉴定评价方面，突出企业评价的主体作用，重点在技师、高级技师的考核评审工作中规范和完善工作业绩、潜在能力考核指标，建立工作现场评价和工作过程评价的企业佐证机制；做好企业、行业、部级技术能手评选的有效衔接，充分发挥技能竞赛在促进高技能人才培养选拔中的重要作用。集中选拔行业技术技能专家领军人才（如中华技能大奖获得者、全国技术能手、部分电力行业技术能手和资深考评员等），组成专家小组，针对行业技术要求和发展趋势，研究制定鉴定考核命题技术导引和题库建设框架指导意见，提高了鉴定考核的科学性与先进性。

强化质量督导，探索构建鉴定质量管理长效机制

首先，质量督导工作实行定期与不定期的常态化，增加技术督导与现场督导的比重与覆盖面。加强各鉴定机构在质量督导方式方法上的交流与沟通，坚持年检、自查、互查与行业检查制度的贯彻与落实。其次，进一步完善了考评人员管理制度。建立了考评人员职业道德诚信机制与考评行为反馈评价制度，组织考评人员的培训认证，增加鉴定考评心理学和专业技术技能的培训内容，开展行业考评人员考评经验座谈和研讨，规范考评行为，提升考评技巧和水平。在鉴定组织实施中，统筹调配考评资源，在鉴定考评队伍中增加非本鉴定区域的考评力量。由考评员、督导员、管理人员和技能专家组成的鉴定工作四支队伍建设不断加强，为提高鉴定工作水平，保证鉴定质量提供了可靠的人才支撑。第三，实行鉴定结果公示制。做好鉴定结果分析评价总结，确保了鉴定的公开与公正。第四，各级鉴定机构通过层层签订鉴定质量管理责任书，落实责任和要求。严格规范证书核发管理，逐步健全了国家职业资格证书查询系统建设工作。第五，制定试行行业鉴定质量体系服务导则，加大质量体系认证的广度和深度，构建了职业技能鉴定质量管理长效机制。

英国的职业技能鉴定概况及特色

英国作为工业革命和现代工业的发源地，既是职业技能分类最早的国家，也是职业教育、实行职业资格证书和职业技能鉴定最早的国家。早在18世纪中叶，英国的各种行业协会就开始组织专门的职业资格考试，如1878年成立的伦敦城市行业协会设计的职业资格考试就多达400多种，几乎涉及到各个专业或职业。但那一时期英国的职业技能鉴定还只是一种传统的职业资格考试，20世纪80年代中期以后，英国建立起全国统一的职业技能鉴定标准，其职业技能鉴定成为一种国家职业技能鉴定。目前，英国已建立健全了职业教育和职业技能鉴定工作完整的网络体系。

职业技能鉴定的流程

英国的职业技能鉴定工作依照国家职业资格标准，根据每一位被鉴定者的状况，通过工作现场考评和收集工作成果等手段来进行评定其职业资格能力。具体的考评鉴定流程分六个阶段，如图1：

职业技能鉴定制度的特色

（1）组织管理体系清晰，职能定位明确。英国的职业技能鉴定组织管理结构如图2所示。

教育与就业部作为政府职能机构，主要负责政策与立法。

国家职业资格委员会，是代表英国政府在全国范围内推行职业资格证书制度的权威部门。主要职能包括：建立职业资格证书体系，制定产业机构，制定国家职业资格标准，开发全国性的国家职业资格体系，准证书机构并对其监督和检查，收集、分析国内外有关职业资格信息。

产业指导机构，一般为行业性的非政府民间机构，负责本行业国家职业资格标准的制定，并使其不断完善以适应生产技术的发展变化。理论上产业指导机构只负责制定标准，但实际上，许多产业指导机构既制定标准，同时又是证书机构。

证书机构，是经国家职业资格委员会批准的有权颁发国家职业资格证书的机构，负责职业资格的鉴定和运作。主要职责：审查批准鉴定中心；管理和认可鉴定程序；挑选、培训外部监督员，并监督检查其工作；检查鉴定的质量保证体系。

培训与企业委员会，负责推行国家职业资格培训计划，各地区都设有培训与企业委员会组织。

鉴定中心，大体分为企业型鉴定中心和学院（或培训中心）型鉴定中心。企业型鉴定中心就是一个企业本身被批准作为鉴定中心，负责对其员工进行职业资格鉴定，是英国国家职业资格证书体系的主体。一般说来，只要企业有开展国家职业资格的积极性，都能得到政府和证书机构的认可和支持，即使个别条件不具备，通过外聘考评员、内部监督员、委托或指定其它鉴定中心等方式，也可以在本企业内开展国家职业资格的培训和鉴定工作。

考评员和督考员，对鉴定过程进行监控，实行持证上岗制度，其资格标准均由“培训与开发指导机构”制定，并严格按照资格标准的要求进行培训和鉴定。考评员分为一线和二线考评员，考评员决定申请人是否具有某种职业能力。一线考评员只负责工作现场的操作，进行观察和提问；二线考评员负责一线考评员职责以外的工作，对证据和以前考核结果进行确认。督考员分为内部督考员和外部督考员，内部督考员负责检查考评员考核结果，保证不同考评员按照国家标准考核；外部考评员对鉴定中心资格的确认和控制鉴定中心的质量，保证不同鉴定中心按照国家职业标准考核。

（2）注重研究培训方法，重在提高培训效能。目前，英国在职业技能培训的模式上进行着一系列的变革，着重在方法的灵活性和教育投入的效能上下功夫：①受培训者可选择任何一种适合自己的方式接受培训，不受时间、地点或场所的限制。受训者均可以通过职业教育机构的中央信息和咨询中心的数据库终端，检索到各种职业的技能要求、培训机构、内容、方法、时间以及地点等方面的信息资料。然后根据自身实际情况选择一种适合的培训方式，并可以在职业技术教育机构或培训中心学习，也可直接在工作场所学习实践或是在家自学。学习的进度既可以由培训机构帮助拟订，也可以由自己掌握，一旦某个单元学习结束，经技能鉴定考核合格者，其学分即记录在个人的“国家职业成绩档案”中。②建立“起始评估”制度。所谓“起始评估”，是指在对受培训者进行培训之前，先对受培训者进行原有知识和技能水平的评估，以决定相应的学习起点。通过起始评估，受培训者可以出示有关知识方面的学习成绩和技能方面的证据材料，得到培训机构的认可并给予相应的单元学分，然后再由培训机构向受培训者指出“尚未达到的标准”，需要培训的方面。

（3）职业技能资格鉴定标准的社会化。开展职业技能鉴定，标准的确定尤为重要，关系到鉴定者行为推测的尺度，同时也为被鉴定者提供了努力的目标和方向。所谓职业技能资格鉴定标推的社会化，是指职业技能鉴定的标准，不以满足某企业或公司的短期需要为标准，而是以整个社会发展需要的技能资格标准为目标，同时考虑到与国际标准考核证书相衔接。目前，在英国推行的“国家职业资格”考核体系中，约有180个“产业指导机构”研究制定国家职业资格能力要素及其操作标准问题，并且规定国家职业资格的使用期限最多为5年。同时还要根据社会需要对标推进行不断修订。

英国的职业技能鉴定制度对我们的借鉴

目前电力行业的职业技能鉴定工作正逐步走向规范化、智能化、科学化发展的轨道，但随着全社会对高技能人才队伍建设的高度重视和普遍关注，电力行业的职业技能鉴定工作仍需不断加以优化，为适应飞速发展的电力技术，为我国电力工业加速走向世界培养大批高素质技能人才。

（1）拓展提高鉴定效能方式。目前，在提高培训效能方面主要是通过在鉴定过程中运用先进技术，如智能化考试、仿真技术的使用等使鉴定更加方便、直观，从而提高鉴定的效能。除了通过技术手段提高鉴定工作的效能外，英国采用的灵活的培训方式和“起始评估”的鉴定制度为我们开辟了思路。“起始评估”不仅有利于避免培训和考核内容上的不必要重复，且能够大大减少教育资源的浪费。

（2）考评标准与生产相结合。英国的国家职业资格标准不仅是培训和鉴定的标准，同时也是生产过程的工作标准。我国国家职业标准是基于职业或工种进行开发的，但是随着企业生产发展和技术进步，大中型企业的劳动分工越来越细，而职业工种的要求相比于企业的岗位要求则宽泛得多，使得国家职业标准的共性要求与企业岗位的个性要求难以有效衔接。因此，可借鉴英国的国家职业资格标准确立方式，国家职业资格标准体系从标准到鉴定过程强化与生产体系的紧密结合，形成资格标准和鉴定内容与实际工作相对应，防止依据职业标准进行培训和鉴定的主要内容与企业的岗位实际脱节。

转正考核鉴定表个人总结篇4

【关键词】il8;正义/反义;真核表达载体;卵巢癌细胞

constructionandexpressionofhumanil8senseorantisenseeukaryoticexpressionvectors

niuxiulong,wangyue*,quye,guoxiaoqin,yelu

departmentofimmunology,medicalcollegeofchinesepeople’sarmedpoliceforces,tianjin300162,china

[abstract]aim:toconstructthesenseorantisenseil8eukaryoticexpressionvectors.methods:senseorantisenseil8fulllengthgenewereamplifiedbyrtpcrandclonedintoeukaryoticexpressionvectorpcdna3.1(+).aftertheidentificationbypcr,restrictionendonucleasedigestionandthenucleotidesequencing,therecombinantvectorsweretransfectedintohumanovariancarcinomaa2780andskov3celllinestransientlybylipofectaminemediation.theexpressionofil8geneandproteinweredetectedbyrtpcrandelisa.results:thesenseorantisenseil8eukaryoticexpressionvectorswereconstructedandverified.theexpressionofil8geneandproteinina2780cellstransfectedwithpcdna3.1(+)ssil8wereincreased,whereastheexpressionofil8proteininskov3cellstransfectedwithpcdna3.1(+)asil8wasdecreased.conclusion:theeukaryoticexpressionvectorspcdna3.1(+)ssil8orpcdna3.1(+)asil8havebeenconstructedsuccessfully,whichlaysabaseforfurtherstudyonrolesofil8inovariancancerandothertumors.

[keywords]il8;senseorantisense;eukaryoticexpressionvector;ovariancarcinomacells

il8是一种多功能的趋化因子,可参与多种恶性肿瘤的生长、转移及血管生成。www.133229.Com近年来研究表明[1,2],il8在卵巢癌中高表达,其高表达可能与卵巢癌发生、发展及化疗关系密切。我们前期研究发现[3,4],il8及雌、雄激素均可促进卵巢癌细胞增殖;il8还可在无雌、雄激素的条件下调节卵巢癌细胞表达雌、雄激素的受体,从而增加该细胞对两种激素的敏感性。为了深入探讨il8在卵巢癌发生、发展及化疗和内分泌治疗中的作用及作用机制,我们应用基因重组技术,成功构建人il8正义(sense,ss)和反义(antisense,as)真核表达载体,从而为后续研究il8在卵巢癌及其他肿瘤中的作用及作用机制奠定基础。

1材料和方法

1.1材料top10感受态细菌购自北京天根生物公司;真核表达载体pcdna3.1(+)为美国invitrogen公司产品,由本室保存。人卵巢癌细胞系a2780和skov3细胞均为美国atcc公司产品,由本室保存。rpmi1640培养基为美国gibco公司产品;2×premixtaq、mmlv逆转录酶、bamhⅰ、xhoⅰ为takara公司产品;t4dna连接酶为美国neb公司产品、dna胶回收试剂盒为加拿大biobasic公司产品;人il8elisa试剂盒为美国r&d公司产品;optimemⅰ、lipofectaminetm2000、trizol试剂为美国invitrogen公司产品;100bp和1kbdnamarker、高纯度质粒小提试剂盒购自北京天根生物公司。

1.2方法

1.2.1引物设计人il8全长编码基因扩增用引物,参照genbank数据库(nm000584.2),采用dnaman软件设计,senseil8引物,f:5′ctcggatccatgacttccaagctggccgtg3′(划线部分为bamhⅰ酶切位点),r:5′agactcgagttatgaattctcagccctctt3′(划线部分为xhoⅰ酶切位点);目的片段318bp。antisenseil8引物,f:5′ctcggatccatgtgaattctcagccctctt3′(划线部分为bamhⅰ酶切位点),r:5′agactcgagttaacttccaagctggccgtg3′(划线部分为xhoⅰ酶切位点),目的片段318bp。

1.2.2目的基因的扩增自skov3细胞中提取总rna作为逆转录模板,采用rtpcr方法扩增il8正义全长目的基因片段。逆转录反应条件参照takarammlv逆转录酶说明书进行,逆转录产生的cdna经pcr扩增获得约300bp大小的目的片段(引物序列见1.2.1)。50μlil8正义pcr产物经12g/l琼脂糖凝胶电泳后,按照dna胶回收试剂盒说明回收纯化dna片段。以此纯化的il8正义pcr产物为模板,扩增il8反义全长目的基因片段(引物序列见1.2.1)。pcr反应体系:cdna0.5μl,2×premixtaq25μl,上、下游引物各25pmol,加双蒸水至总体积50μl。pcr反应条件:94℃5min预变性;94℃30s变性,59℃45s退火,72℃1min延伸,34个循环;72℃延伸10min。

1.2.3重组质粒的构建空载体pcdna3.1(+)、il8正义或反义pcr纯化回收产物分别用bamhⅰ和xhoⅰ进行双酶切,经电泳回收目的条带后定量。按照目的片段和载体片段摩尔比为3∶1的原则,用t4dna连接酶将双酶切后的目的片段和空载体进行连接,而后转化入top10感受态细菌。将转化细菌均匀涂布于含氨苄青霉素50mg/l的lb琼脂平板上,倒置于37℃温箱培养12h(过夜)。

1.2.4重组质粒的鉴定挑取孤立菌落,用100μl去离子水重悬,作为模板,进行菌落pcr扩增鉴定。pcr反应体系为:菌落1μl,2×premixtaq10μl,上、下游引物各10pmol(引物序列见1.2.1),加双蒸水至总体积20μl。pcr反应条件同1.2.2。经菌落pcr鉴定阳性的单菌落,接种于含氨苄青霉素100mg/l的lb液体培养基中,37℃恒温摇床震荡培养过夜,按照质粒小量提取试剂盒说明提取质粒,并用bamhⅰ和xhoⅰ进行双酶切鉴定。经菌落pcr和酶切鉴定证实有插入片段后,将阳性菌液2ml送北京天根生物公司测序,将测序结果正确的重组载体分别命名为pcdna3.1(+)ssil8和pcdna3.1(+)asil8。

1.2.5细胞瞬时转染采用脂质体法将重组载体pcdna3.1(+)ssil8或pcdna3.1(+)asil8及空载体pcdna3.1(+)分别导入a2780细胞和skov3细胞中。按照脂质体lipofectaminetm2000说明书进行,具体步骤如下:用无抗生素、含100ml/lfbs的rpmi1640培养液调整细胞密度为2×108/l,每孔2ml加入6孔板,37℃、50ml/lco2培养过夜。待细胞生长至80%融合时,更换新鲜的无抗生素、含100ml/lfbs的rpmi1640培养液。准备a、b两液,a液:250μloptimemⅰ,加入4μg重组载体或空载体,轻混;b液:250μloptimemⅰ,加入10μl脂质体,轻混后室温放置5min。上述两液混合后,室温放置20min,加入到每孔细胞中,37℃、50ml/lco2培养6h后,更换无抗生素、含100ml/lfbs的rpmi1640培养液,每孔2ml。转染细胞分别命名为pcdna3.1(+)/a2780、pcdna3.1(+)ssil8/a2780和pcdna3.1(+)/skov3、pcdna3.1(+)asil8/skov3。

1.2.6细胞转染后il8表达水平的检测转染后24h,采用elisa法检测上清中il8的含量;同时收集细胞,抽提rna后分别以il8的特异性引物进行rtpcr反应。引物序列如下:il8,f:5′aacatgacttccaagctggccg3′,r:5′cagttttccttggggtccagac3′,目的片段251bp;内参照gapdh,f:5′ctcagacaccatggggaaggtga3′,r:5′atgatcttgaggctgttgtcata3′,目的片段450bp。pcr反应体系:cdna1.0μl,2×premixtaq10μl,上、下游引物各10pmol,加双蒸水至总体积20μl。pcr反应条件:94℃5min预变性;94℃30s变性,59℃45s退火,72℃1min延伸,34个循环;72℃延伸10min。反应结束后,取pcr反应液5μl于12g/l琼脂糖凝胶电泳。

2结果

2.1正义和反义il8全长基因片段扩增以skov3细胞的总rna为模板,应用前述引物进行rtpcr,将扩增产物进行12g/l琼脂糖凝胶电泳(图1),可见300bp左右单一条带,与预计片段长度(318bp)相符。

2.2重组载体的构建与鉴定目的片段和空载体分别经bamhⅰ和xhoⅰ双酶切,按照目的片段与空载体的摩尔比为3∶1进行连接反应,连接产物进行转化并过夜培养,次日可见阳性菌落形成。挑选独立阳性菌落进行pcr扩增后,可见约300bp的条带(图2)。挑取pcr鉴定阳性的菌落摇菌,提取质粒dna后进行bamhⅰ和xhoⅰ双酶切鉴定(图3),可见约5.3kb和300bp左右的片段出现,说明真核表达载体pcdna3.1(+)上已成功插入了ssil8或asil8全长编码基因。对阳性克隆中的插入片段进行序列测定,结果显示,所克隆的基因与genbank数据库中人il8的正义及反义全长序列完全一致。

2.3rtpcr技术检测il8mrna在a2780细胞中的表达与对照a2780细胞和pcdna3.1(+)/a2780细胞相比(图4),pcdna3.1(+)ssil8/a2780细胞的il8mrna的表达水平明显增高,而未转染细胞和转染空载体细胞之间差别不大。

2.4elisa法检测il8蛋白在a2780和skov3细胞中的表达转染正义il8的pcdna3.1(+)ssil8/a2780细胞的il8蛋白表达水平为(1.043±0.004)μg/l,明显高于转染空载体的pcdna3.1(+)/a2780细胞(0.010±0.001)μg/l(p<0.01)(图5),与rtpcr结果相符,进一步证实il8的正义表达载体构建成功,并能促进a2780细胞高表达il8。转染反义il8的pcdna3.1(+)asil8/skov3细胞的il8蛋白表达水平为(0.835±0.003)μg/l,低于转染空载体的pcdna3.1(+)/skov3细胞(0.969±0.001)μg/l(p<0.05),证实il8的反义表达载体构建成功,并能抑制skov3细胞表达il8。

3讨论

il8是一种多功能的趋化性细胞因子,有学者认为il8具有激活嗜中性粒细胞聚集到肿瘤局部,对肿瘤细胞起杀伤和抑制作用;而多数学者认为,il8能促进肿瘤的生长和转移,其机制主要是通过作为自分泌生长因子、血管发生因子和促进ⅳ型胶原酶的活性以及影响细胞的黏附移动,从而促进肿瘤的发生、发展和转移。il8在多数肿瘤组织中高表达,而在其相应的正常组织却不表达或低表达[5]。研究表明,卵巢癌患者高表达il8,其腹水中表达水平明显高于血清[1]。应用免疫组化技术发现,卵巢癌患者局部肿瘤组织中的il8高表达与肿瘤的进展程度及不良预后有关[2]。从卵巢癌细胞系heya8分离出的il8高分泌克隆heya8(h)的增殖率明显高于低分泌克隆heya8(l),il8可促进heya8(l)克隆的增殖,而il8的中和抗体可降低heya8(h)克隆的增殖;应用il8表达载体转染的heya8(l)克隆以增强il8的表达后,可明显促进肿瘤细胞的增殖、微血管密度以及后来的肿瘤形成[6]。il8还可封闭tnf相关凋亡诱导配体(tnfrelatedapoptosisinducingligand,trail)诱导的细胞死亡,并且能使trail敏感的细胞系转变为trail抗性细胞系,表明il8在保护卵巢癌细胞逃避trail介导的凋亡中起重要作用[7]。此外,il8表达可影响卵巢癌对化疗的敏感性。应用基因芯片技术分析发现,紫杉醇耐药卵巢癌细胞的il8mrna及蛋白表达均增加。penson等报道[1],卵巢癌患者在紫杉醇治疗前给予甾体类抗雌激素治疗则血清中il8水平下降,紫杉醇治疗后24h则其水平上升。这一结果与早期lee等人体外研究发现的紫杉醇可诱导人卵巢癌细胞的il8转录和分泌的结果相一致。目前有关il8诱导卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药的机制尚不十分清楚。

我们以往的研究证明人卵巢癌细胞系skov3可组成性高表达il8[5,8],而本研究证实,另一种人卵巢癌细胞系a2780中的il8表达水平极低。提示这两种卵巢癌细胞可作为研究il8在卵巢癌中作用及作用机制的一个良好模型。本研究首先从高表达il8的skov3细胞中提取总rna并以此为模板,根据人il8的全长编码区基因序列设计并合成ssil8和asil8两对引物,通过rtpcr获得318bp大小的目的片段即正义和反义il8全长编码基因,并将其克隆入真核表达载体pcdna3.1(+)中,由此构建了重组载体pcdna3.1(+)ssil8和pcdna3.1(+)asil8,后经菌落pcr、双酶切及核苷酸测序,证实所获片段和目的片段序列完全一致。最后应用脂质体法将il8正义和反义表达载体分别导入低表达il8的a2780细胞和高表达il8的skov3细胞中,并用rtpcr和elisa法检测细胞转染后il8的表达水平,发现il8的表达量具有明显差异,从而达到了预期的试验目的。总之,人il8正义和反义真核表达载体的成功构建,将为我们后续研究il8在卵巢癌发展及化疗、内分泌治疗中的作用与作用机制奠定基础,同时也为研究其他高表达il8的恶性肿瘤提供参考。

【参考文献】

[1]pensonrt,kronishk,duanz,etal.cytokinesil1beta,il2,il6,il8,mcp1,gmcsfandtnfalphainpatientswithepithelialovariancancerandtheirrelationshiptotreatmentwithpaclitaxe[j].intjgynecolcancer,2000,10(1):33-41.

转正考核鉴定表个人总结篇5

一、考核目的：

为了完善薪资管理体系，提高工作绩效，提供员工职务的调整、薪酬福利、培训及奖金核定的依据，增强绩效管理和绩效改进。保障组织有效运行，特制定本制度。

二、考核范围：全体员工（进入公司不满3个月者或者未转正者不参加月度、年终考核）。

三、考核原则：

3.1以客观事实为依据，以考核制度规定的内容、程序与方法为准绳；

3.2考核力求公平、公开、公正的原则来进行。

四、考核公式及其换算比例：

4.1绩效考核计算公式=Kpi绩效（50）+360度考核（30）+个人行为鉴定20

4.2绩效换算比例：Kpi绩效总计100分占50;360度考核总计200分占30;个人行为鉴定总计占20.

五、绩效考核相关名词解释：

5.1绩效考核：为了实现第一条规定的目的，以客观的事实为依据，对员工品性、业绩、能力和努力程度进行有组织的观察、分析和评价。

5.2Kpi（Keyperformanceindex）：即关键业绩指标，是通过对组织内部某一流程的输入端、输出端的关键参数进行设置、取样、计算、分析，衡量流程绩效的一种目标式量化管理指标。

5.3360度考核：是一种从不同层面的人员中收集考评信息，从多角度对员工进行综合绩效考核并提供反馈的方法，考评不仅有上级主管，还包括其他与被考评密切接触的人员。

5.4个人行为鉴定：是指被考核者，在日常工作中，违反公司相关考勤、培训、工作流程等规章制度而被处罚分数或者有建议性提议、突出性表现而被奖励行为的结果。

六、绩效考核细则

6.1Kpi绩效根据部门工作性质和内容制订，每个被考核人有10项考核内容，总分为100分，根据工作权重分别计分。占绩效考核总分的比例为50.

6.2主管级以下人员，在360度考核中分数，为部门管理类人员的平均分。

6.3个人行为鉴定考核

6.3.1个人行为鉴定考核总分为100分

6.3.2迟到、早退一次每次扣除2分

6.3.3旷工半天每次扣除5分依次类推。

6.3.4忘记打卡每月3次以上（含）每次扣除0.5分

6.3.5每月请事假1天以上（不含）每天扣除1分依次类推。

6.3.6警告、记小过、记大过、每次分别扣除5分、10分、20分

6.3.7嘉奖、记小功、记大功、每次分别奖励10分、20分、40分

6.3.8提出合理化建议且被公司采纳并经实践证明确实有益者，根据实际情况给予奖励

6.3.9无故不参加公司举行的会议、活动、培训者一次扣除5分依次类推。

6.3.10在RoHS推行体系中，一项不达标者扣除个人行为鉴定分数20分。

七、考核时间：

7.1月度考核：次月的第1个星期考核上个月的绩效，7个工作日内结束。

7.2年度考核：在次年1月的第2个星期考核，14个工作日内结束。

八、考核等级/比例：

8.1个人绩效津贴比例：

根据个人职务、职等、层级分类，F1-8不做考核，其他人员参照《薪资管理办法》中的考核工资标准。

8.2个人绩效津贴给付比例：

优等：当月绩效基本津贴×120;

甲等：当月绩效基本津贴×100;

乙等：当月绩效基本津贴×90;

丙等：当月绩效基本津贴×80;

丁等：当月绩效基本津贴×70.

8.3个人绩效考核等级标准：

优等：当月绩效考核91分以上

甲等：当月绩效考核80-90分

乙等：当月绩效考核70-79分

丙等：当月绩效考核60-69分

丁等：当月绩效考核59分以下

九、年度考核规定及薪资提升标准：

9.1年度考核是调整员工下年度工资水平，颁发年终奖金的依据

9.2进入公司不满3个月者不参加年终考核。

在公司服务满1年按考核成绩予以提薪（针对职员类），具体参考标准如下：

优等：薪资上调二级档位

甲等：薪资上调一级档位

乙等：薪资档位不变

丙等：薪资下调一级档位

丁等：解雇

9.2生产直接人员，根据国家相关法律法规调整。

十、考核纪律：

10.1上级考核必须公正、公平、认真、负责，上级领导不负责或不负责或不公正者，一经发现将给予降职、扣除当月绩效奖或扣分处理。

10.2各部门负责人要认真组织，慎重打分，凡在考核中消极应付，将给予扣分甚至扣除全月绩效和岗位津贴。

10.3考核工作必须在规定的时间内按时完成。

10.4弄虚作假者，考核者与被考核者的绩效一律按总分的0记分。

十一、考核仲裁：

11.1为保证考核的客观公正、持续改善考核方法，特成立考核小组，人员为各部门权责负责人，组长为人力资源部经理。

11.2考核小组负责处理以下事务；

a、对考评人的监督约束

B、考核投诉的处理；

C、讨论并通过各部门设定的绩效考核指标；

D、每半年检讨考核制度，视情况修订考核制度及指标。

11.3被考核人对考核结果持有异议时，可在绩效面谈结束之后的三天内向考核小组提出仲裁，逾期不予受理。

11.4考核小组接到被考核人的仲裁申请后，在考核面谈的第5天组织考核仲裁，仲裁结果为终审。

十二、绩效面谈

12.1绩效面谈是提高绩效的有效途径，各部门主管权责主管必须在考核结束后一星期内安排绩效面谈，办公室职员的上司安排单独绩效面谈，普通员工可以"考核总结会议"的方式进行，但对于最优秀员工与最差员工，应予以单独面谈，并在考核结束后的10内将面谈记录原件交到人力资源部，部门留存复印件。

12.2绩效面谈的内容详见考核表背面的《绩效面谈表》，面谈记录的内容将作为员工下一步绩效改进的目标，培训安排的参考。

十三、本办法执行初期每半年检视讨论一次，以后视实际执行需要修订，考核小组总结讨论后交人力资源部负责修订，呈报总经理审核后批准执行。

转正考核鉴定表个人总结篇6

王胜军苏兆亮陈建国夏圣邵启祥黄新祥许化溪

【摘要】目的：克隆并原核表达小鼠高迁移率族蛋白1（highmobilitygroupbox1，HmGB1）。方法：从小鼠脾脏细胞中提取总Rna，应用RtpCR获得小鼠HmGB1cDna，经pCR扩增小鼠HmGB1基因；通过ta克隆将该基因构建到pmD18t载体中，测序鉴定；将该基因插入pet28a(+)表达载体，iptG诱导后，可表达相对分子质量约30kDa的蛋白。蛋白质印迹鉴定表达的目的蛋白。结果：经RtpCR扩增得到648bp的Dna片段，序列分析显示与基因库中报道的已知序列完全一致；构建了含有HmGB1编码序列的原核表达载体，经诱导表达、蛋白质印迹鉴定，获得相对分子质量约30kDa的融合蛋白。结论：成功克隆和表达了小鼠HmGB1基因，为HmGB1蛋白的功能试验奠定了基础。

【关键词】高迁移率族蛋白；克隆；原核表达

［abstract］objective:tocloneandexpressmousehighmobilitygroupboxchromosomalprotein1(HmGB1)gene.methods：totalRnawasextractedfrommousespleencells，andthewholelengthofHmGB1genewasobtainedbyRtpCR.theHmGB1genewasclonedintopmD18tvectorbytacloneandsequenced.thenthegenewasinsertedintopet28a(+)expressionvector.identifiedbywesternBlot.Results：thetargetDnasequenceofHmGB1wasobtainedbyRtpCRwhichwasabout648bplength，sequencingresultsshowedthatHmGB1genewasexactlyconsistentwiththesequencereportedinGenBank;westernBlotidentifiedtherewasaproteinstrapaboutmr.30000.theHmGB1proteinwassuccessfullyexpressed.Conclusion：CloneandexpressmouseHmGB1gene.itmightprovideafoundationforfurtherstudyontheproteinofHmGB1function.

［Keywords］highmobilitygroupbox1;clone;prokaryoticexpress

高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupbox1，HmGB1)是高迁移率族蛋白超家族的成员之一，是一种含量丰富的非组蛋白核蛋白［1］。编码区由648bp组成，编码215个氨基酸，在核内具有调节基因转录和表达等作用；在细胞外HmGB1可以诱导某些炎症因子的释放，作为一种晚期炎症因子参与脓毒血症的发病过程［2，3］。最近研究表明，HmGB1也参与自身免疫性疾病的发病过程，如类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮等［4，5］。但其确切的作用机制尚未完全清楚。本研究克隆并表达了小鼠HmGB1，经鉴定表明获得了小鼠HmGB1的融合蛋白，为进一步探讨HmGB1对免疫细胞的调节及其在类风湿性关节炎中的作用机制，寻找类风湿性关节炎治疗的新途径奠定了基础。

1材料与方法

1.1材料

大肠埃希菌Rossta，DH5α，质粒pet28a(+)为本室保存；trizol购自invitrogen公司；DnaGelextractionKit、各种限制性内切酶、t4Dna连接酶、rtaq酶、pmD18t载体购自taKaRa宝生物工程(大连)有限公司；amVReversetranscriptase，Rnaseinhibitor均购自Sigma公司;鼠抗Histag单克隆抗体购自omiga公司;HistrapHp购自GeHealthcare公司。

1.2方法

1.2.1pCR引物和设计根据基因库中小鼠HmGB1mRna序列，设计编码区的特异性引物：上游引物序列为p1:5′CGaGCtCatGGGCaaaGGaGatCCt3′，下游引物序列为p2：5′CCaaGCttttattCatCatCatCatC3′，在上下游引物5′端分别插入SacⅠ和HindⅢ酶切位点和保护碱基，以便于酶切、克隆。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.2.2总Rna的提取及RtpCR颈椎脱臼处死成年小鼠，无菌取脾脏，经充分研磨过滤后，用trizol一步法提取总Rna，逆转录获得cDna模板，然后用HmGB1编码区特异性引物进行pCR扩增。循环条件为：94℃30s，57℃30s，72℃45s，共30个循环。取5μlpCR产物，用1%的琼脂糖凝胶电泳，eB染色后，紫外透射分析仪观察结果。

1.2.3ta克隆pCR扩增产物到pmD18t载体回收pCR产物，ta克隆pmD18t。转化大肠埃希菌DH5α感受态，培养后挑取单个菌落、提取质粒、SacⅠ和HindⅢ双酶切鉴定，将阳性重组子命名为pmD18tHmGB1并送上海生工生物工程技术服务有限公司测序证实。

1.2.4HmGB1表达载体的构建和诱导表达用SacⅠ和HindⅢ双酶切pmD18tHmGB1和表达质粒pet28a(+)，胶回收后连接转化大肠埃希菌Rossta感受态细胞。挑取生长良好的菌落并接种于3mlLB培养基中，37℃，250r/min增菌过夜，次日以1∶100接种于300mlLB培养基中，37℃培养至D(600)nm=0.4～0.6，加入iptG至终浓度为1mmol/L，30℃诱导4h后离心收集细菌，超声后分别取上清和沉淀，以12g/dl的SDSpaGe及蛋白质印迹分析鉴定表达的蛋白。经限制性内切酶分析，含正确序列的克隆重组质粒命名为pet28HmGB1。

2结果

2.1HmGB1编码区cDna的获得与鉴定

通过1%的琼脂糖凝胶电泳证实，经逆转录获得的一条约648bp大小的特异性条带，与预期目的片段大小相符（图1）。

2.2pmD18tHmGB1的双酶切鉴定结果

将重组质粒Dna经SacⅠ和HindⅢ双酶切后，通过1%琼脂糖凝胶电泳，获得一条约为648bp大小的目的条带，与预期结果相符(图2)。

2.3HmGB1质粒测序结果

将重组质粒pmD18tHmGB1送上海生工工程技术有限公司进行测序，测序结果与基因库中的序列比对完全正确。

2.4pet28HmGB1原核表达载体的构建及鉴定

测序正确的pmD18tHmGB1及pet28a(+)，分别用SacⅠ和HindⅢ双酶切后，回收目的片段HmGB1和载体pet28a(+)，然后用t4连接酶连接构建成重组质粒pet28HmGB1。重组质粒转化Rossta感受态，挑取单个菌落提取质粒，SacⅠ和HindⅢ双酶切后，1%的琼脂糖凝胶电泳，在大约648bp的位置可见目的条带。

2.5pet28HmGB1的原核表达及鉴定

pet28HmGB1的Rossta转化菌，在30℃条件下iptG诱导超声，目的蛋白以可溶性和包涵体形式存在。SDSpaGe电泳可以见到在大约30kD处有一条带，与预期结果相同（图3）。蛋白质印迹鉴定结果见图4。

3讨论

HmGB1是近年来发现的晚期炎症介质，相对分子质量约为30kD，在哺乳动物中高度保守，表达谱较为广泛。HmGB1作为核内蛋白，是核小体的非组蛋白，主要参与核小体的稳定，异化基因转录等。在细胞坏死的情况下HmGB1可释出细胞，但在细胞凋亡时HmGB1则与染色体结合并连同死细胞被机体的吞噬细胞清除，部分HmGB1可由活化的巨噬细胞分泌，但其具体的出胞机制尚未清楚。有研究表明巨噬细胞活化后，可以增加HmGB1的表达和释放［6］。在胞外，HmGB1可以刺激滑膜细胞释放tnFa，iL1，iL6等致炎因子。类风湿性关节炎的发生发展与t，B淋巴细胞的活化有关［7］。近年来研究发现，tnF和HmGB1在类风湿性关节炎的发生发展过程中均作为重要的炎症介质参与炎症反应。封闭tnF的治疗方法已在类风湿性关节炎的治疗中取得了良好的效果。但另有研究发现，敲除tnF的小鼠不仅仍可发生类风湿性关节炎，而且tnF抑制剂治疗效果受到影响，这提示HmGB1等其他分子参与炎症反应的可能性。近年来，HmGB1在类风湿性疾病中的作用正日益受到人们的关注［8］。本研究成功克隆了小鼠HmGB1编码区全长序列，并在大肠杆菌中获得了融合蛋白的表达，为进一步研究HmGB1对免疫细胞的调节及其在类风湿性关节炎中的作用奠定了基础。

参考文献

［1］Bustinm.RegulationofDnadependentactivitiesbythefunctionalmotifsofthehighmobilitygroupchromosomalproteins［J］.molCellBiol，1999，19(8)：5237-5246.

［2］wangH，YangH，traceyKJ.extracellularroleofHmGB1ininflamationandsepsis［J］.internmed，2004，255(3):320-331.

［3］wangH，YangH，CzuraCJ，etal.HmGB1aslatemediatoroflethalsystemicinflammation［J］.amJRespirCritCaremed，2001，164(10):1768-1773.

［4］RovereQuerinip，Capobiancoa，Scaffidip，etal.HmGB1isanendogenousimmuneadjuvantreleasedbynecroticcells［J］.emBoRep，2004，5(8):825-830.

［5］anejaRK，tsunga，SjodinH，etal.preconditioningwithhighmobilitygroupbox1(HmGB1)induceslipopolysaccharide(LpS)tolerance［J］.LeukocBiol，2008，84(5):1326-1334.

［6］朱明光，常雅萍.高迁移率族蛋白B1的致炎细胞因子作用研究进展［J］.国际免疫学杂志，2006，29（4）：257-260.

转正考核鉴定表个人总结篇7

关键词：线粒体融合蛋白-2；载体构建；鉴定

血管平滑肌细胞（Vascularsmoothmusclecells，VSmCs）的增殖是动脉粥样硬化（atherosclerosis，aS）形成的中心环节。线粒体融合蛋白-2（mitofusin-2，mFn2）是一种细胞增殖抑制因子，能抑制VSmCs增殖[1，2]。本研究拟通过构建人mFn2基因真核表达载体，并将其转染原代人脐静脉平滑肌细胞，荧光定量pCR法及westernblot检测mFn2mRna及蛋白表达，为今后研究mFn2在aS中的作用打下良好基础。

1资料与方法

1.1一般资料原代人脐静脉平滑肌细胞由本实验室培养；Dmem培养基、胎牛血清、胰酶购自Hyclone公司；大肠杆菌感受态DH5α购自北京博迈德生物科技公司；真核基因表达载体peGFp-n1购自Clontech公司；taqDna聚合酶购自宝生物公司；限制性内切酶Bglii及ecoRi、t4Dna连接酶均购自Fermentas公司；逆转录试剂盒及荧光定量pCR试剂盒购自Fermentas公司；tRizol试剂、转染试剂Lipofectamine2000购自invitrogen公司；兔抗人mFn2抗体购自北京博奥森生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1原代细胞人脐静脉平滑肌细胞培养与鉴定采用于海娇[3]等方法培养及鉴定原代培养的人脐静脉平滑肌细胞。

1.2.2人mFn2基因真核表达载体的构建在nCBi网站查找人mFn2mRna编码区序列，并设计引物。上游引物：5'-GaaGatCtatGtCCCtGCtCttCtCtCGat-3'；下游引物：5'-GGaattCtCtGCtGGGCtGCaGGtaCt-3'，上下游引物分别引入Bglii及ecoRi酶切位点（以下划线标出）。tRizol法提取人脐静脉平滑肌细胞总Rna并反转录为cDna，进行pCR扩增；胶回收进行酶切-连接后转化DH5α大肠杆菌，提取质粒经Bglii及ecoRi双酶切及测序鉴定。测序正确者命名为peGFp-mFn2。

1.2.3细胞转染将细胞接种于24孔细胞培养板中，待细胞融合60%～80%时，设置peGFp-n1空质粒对照组及peGFp-mFn2转染组，每组设三个复孔。按照Lipofectamine2000说明书步骤进行，转染各组后37℃细胞培养箱中继续培养，6h后更换完全培养液。48h后用荧光显微镜观测各组细胞绿色荧光蛋白（GFp）表达情况。

1.2.4荧光定量pCR检测mFn2mRna的表达提取转染peGFp-mFn2细胞的总Rna并反转录为cDna进行荧光定量pCR。以GapDH为内参照，根据pCR仪自动生成的Ct值，根据公式：目的基因的相对量=2-Ct计算目的基因的相对表达量。

1.2.5westernblot检测mFn2蛋白的表达按照全蛋白提取试剂盒说明书提取总蛋白进行SDS-paGe电泳，转膜，5%脱脂奶粉室温封闭2h，分别用抗mFn2和抗β-actin抗体4℃孵育过夜，tBSt洗膜；辣根过氧化物酶（1：3000）室温标记1h，tBSt洗膜；X光胶片曝光、显影、定影。照像并分析，以β-actin蛋白为内参，用mFn2与β-actin条带像素灰度的比值表示mFn2蛋白的相对表达量。

1.3统计学分析结果以表示，应用SpSS11.0统计学软件进行统计学分析，采用t检验进行两样本间比较，以p

3讨论

mFn2是近年发现的具有许多生物学功能的蛋白，在VSmCs以及心、肾等组织中广泛分布[4]。研究发现，高血压大鼠、球囊损伤大鼠和apoe基因敲除小鼠的VSmCs中mfn2表达均明显下调。我国学者陈光慧等[1]首次发现mFn2基因控制VSmCs增殖，其机制主要在于mFn2是原癌基因Ras的直接负调控因子，能够与其相互作用，阻滞Ras-Raf-mapK信号转导通路而将细胞周期阻断在G0/G1期。研究还发现，血管紧张素ii、内皮素-1及iL-1等可以通过下调mFn2表达，促进VSmCs的增殖，而相应的受体阻断剂可以阻断该作用；mFn2的表达水平可受到心钠素和肾上腺髓质素的正调节，从而抑制VSmCs的增殖[4]。为了进一步明确mFn2的作用，我们初步构建了含有增强型绿色荧光蛋白（eGFp）报告基因的人mFn2真核重组表达载体。结果表明成功构建了人mFn2基因真核表达载体，并且将其其转染原代培养的VSmCs，利用荧光定量pCR及westernblot可以检测到mFn2mRna及蛋白水平高表达，说明载体构建成功而且成功表达于原代VSmCs，将为今后深入研究mFn2的功能及在aS中的作用奠定了基础。

参考文献：

[1]CHenKH，GUoX，maD，etal.DeregulationofHSGtriggersvascularproliferativedisorders[J].natCellBiol，2004，6（9）：872-883.

[2]Gerhardm，Roddyma，GreagerSJ，etal.ageingprogressivelyimpairsendothelium-dependentvasodilationinforearmresistancevesselsofhuman[J].Human，1996，27（4）：849-853.

转正考核鉴定表个人总结篇8

[关键词]基因;iL-10基因;真核表达载体;载体构建

[中图分类号]Q754[文献标识码]a[文章编号]1673-9701(2009)34-01-03

ConstructionandidentificationofpiReS2-eGFp-hiL-10plasmid

CHenLihong1LiUJingfeng2FanGHangrong1QiUminglian2

1.Departmentofpathology,FujianmedicalUniversity,Fuzhou350004,China;2.theFirstaffiliatedHospitalofFujianmedicalUniversity,Fuzhou350004,China

[abstract]objectivetoconstructthepiReS2-eGFp-hiL-10plasmidofhuman.methodsiL-10genewasamplifiedfromhumanperipheralbloodlymphocytesbyusingRt-pCR,andthenpiReS2-eGFp-hiL-10plasmidwasconstructed.theidentificationwasdonebyusingendonucleasecutting,pCRandsequencingandtheplasmidconcentrationandpurityweredetectedbyusingUVspectrophotometer.Resultsendonucleasecutting.pCRandsequencingshowedthesuccessfulconstructionofpiReS2-eGFp-hiL-10plasmid.ConclusionweconstructpiReS2-eGFp-hiL-10plasmidsuccessfullyandlaythefoundationforimmunotoleranceresearchesintheorgantransplantation.

[Keywords]Gene;iL-10gene;eukaryoticexpressionvector;Vectorconstruction

白细胞介素10(interleukin10,iL-10)是最初由mosman等1989年发现的一种由th2分泌的细胞因子,它能抑制thl细胞因子的分泌。近来,越来越多的研究表明iL-10具有抑制免疫活性细胞的激活和细胞因子产生的作用,与移植物排斥有密切关系,因此在器官移植领域,越来越多的研究表明,iL-10能通过多种途径来抑制或减轻排斥反应,从而延长移植物的存活时间。我们通过构建hiL-10真核表达载体为今后在器官移植免疫耐受的进一步实验研究提供依据。

1材料与方法

1.1外周血单核细胞的制备

取正常人新鲜抗凝血5mL与Hanks液等量混匀后,加于4mL淋巴细胞分离液上,离心收集细胞,用5mL含10%的胎牛血清1640Cm培养液悬浮,加入25mg/L的Cona,于37℃、5%Co2培养箱中孵育24h。

1.2Rt-pCR扩增人iL-10基因

淋巴细胞经Cona刺激后,用trizol试剂按说明书提取总Rna。逆转录体系为:模板Rna溶液5μL,5×Rtbuffer4μL,dntp(各10mmol/L)混合物2μL,Rna酶抑制剂0.5μL,引物设计参照GenBank上人iL-10基因序列分别设计引物下、下游引物。上游引物:iL-10F:CCGCtCGaGCCaCCatGCaCaGCtCaGCaCtGCtCt,下游引物:iL-10R:CCGGaattCtCaGtttCGtatCttCattGtC。oligo(dt)引物1μL,amV返转录酶1μL,DepC水6.5μL。42℃保温1h,置95℃温育5min使amV逆转录酶失活。将此反转录产物直接进行pCR。目的片段大小约540bp。pCR反应条件:94℃预变性2min,94℃变性30s,65℃退火30s,72℃延伸1min,共30个循环,最后72℃延伸10min。pCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定(100V,30min),凝胶成像系统摄像。

1.3真核表达载体piReS2-eGFp-hiL10的构建

1%琼脂糖凝胶电泳分离并回收pCR产物,连同piReS2-eGFp空载体,经Xhoi和ecoRi双酶切后,t4Dna连接酶4℃过夜连接,连接产物按常规方法转化于DH5a感受态细胞。挑取单克隆菌落进行扩增培养,采用HiSpeedplasmidmidiKit质粒纯化试剂盒(QiaGen公司)抽提质粒,详见说明书。

1.4真核表达载体piReS2-eGFp-hiL10鉴定

1.4.1限制性内切酶酶切、电泳及片段回收取iL-10质粒抽提产物用(CtCGaGCCaCCatG)和(GaattCtCa)双酶切,反应体系:Xhoi1μL,ecoRi1μL,10×KBuffer2μL,重组质粒(118μg/mL)5μL,灭菌双蒸水11μL,反应混合液混匀后置37℃酶切过夜后,1%琼脂糖电泳(100V,30min)凝胶成像仪成像。

1.4.2pCR法鉴定hiL-10目的基因片段iL-10基因上游引物:5atGCaCaGCtCaGCaCtGCtCt3,下游:5tCaGtttCGtatCttCattGtC3,预期产物大小为450bp。

反应总体积25μL,反应体系如下:10×Buffer2.5μL,灭菌双蒸水17.375μL,dntpmixture(各2.5mm)2μL,上游引物(10μm)1μL,下游引物(10μm)1μL,菌液1μL,taq(5U/μL)0.125μL,总体积25μL。pCR反应条件:94℃预变性5min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,共30个循环,最后72℃延伸7min。pCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定(100V,30min),凝胶成像系统摄像。

1.4.3测序取质粒抽提产物1mL,用通用引物送博亚公司测序。

2结果

2.1hiL-10基因的pCR产物电泳分析

琼脂糖凝胶电泳结果显示,pCR扩增产物均为一条带,对比marker,大小同预期结果一致(图1)。

2.2重组质粒的酶切鉴定

紫外灯下定位切取所需Dn段凝胶条,重组质粒piReS2-eGFp-hiL-10酶切后显示2kb和540bp两个条带(图2)。

2.3重组质粒测序鉴定

重组质粒piReS2-eGFp-hiL-10抽提产物测序结果(图3),经Genebank的序列比对,两重组目的基因序列完全正确。

2.4重组质粒的结构图(图4)

2.5紫外分光光度计测定中量抽提质粒确定浓度及纯度(表1)

3讨论

白细胞介素10(interleukin10,iL-10)最初于1989年由Fiorentino等发现,他们证明iL-10由th2淋巴细胞和单核细胞合成分泌,具有抗炎和抑制多种细胞因子合成的作用,所以称之为细胞因子合成抑制因子(cytokinesynthesisinhibitingfactor,CSiF)[1]。人iL-10(hiL-10)基因定位于第一号染色体上,编码178个氨基酸,其中含18个氨基酸疏水信号序列,成熟蛋白含160个氨基酸。iL-10的生物学功能主要有iL-10能抑制抗原特异的t细胞增殖和分泌致炎细胞因子。iL-10能直接作用于t细胞上的CD28协同刺激受体,阻断CD28酪氨酸磷酸化过程和CD28分子介导的信号传导通路,从而有效抑制t细胞的增殖和细胞因子的产生,诱导t细胞耐受。此外,iL-10还可以通过特异的抑制t细胞iL-2的分泌而抑制t细胞的增殖[2]。iL-10这种抑制t细胞分泌iL-2,tnF-α,iFn-γ的作用可使机体的迟发性变态反应受到抑制。此外,iL-10通过抑制iFn-γ的产生抑制nK细胞的活性。它对单核细胞和巨噬细胞的影响也主要是抑制性的。总之,iL-10的这些生物学活性显示其为一种潜在的免疫增殖反应和炎症反应的负性调节因子[3-6],是一种针对同种异体器官移植的有益的细胞因子。

目前的转基因载体主要分为病毒载体系统和非病毒载体系统。其中病毒载体较有效,是目前基因治疗的主要手段,但病毒载体存在一些缺陷,包括安全性、免疫原性、对靶细胞有一定的毒性、非导向性。有限的携带能力,生产和包装问题、成本高昂等,限制了其推广应用。非病毒类价格比病毒低廉且安全,较少产生抗原性[7]。

荧光蛋白标记技术是近年来迅速发展的一种新型细胞示踪技术,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFp)基因片段较小,易于构建融合蛋白,本实验中选用的piReS2-eGFp表达载体,进入靶细胞后,具有安全性好,容量大等特点。以增强型绿色荧光蛋白(eGFp)作为报告基因,使eGFp的荧光强度提高了35倍,而且转染16～24h后仍可稳定表达,由于eGFp报告基因检测非常方便,有别其他报告基因检测需加入底物,具有直观、及时、应用范围广的特点,是其他报告基因所无法比拟的。我们首先从人外周血分离得到淋巴细胞,通过分子克隆的手段得到了人iL-10基因,并成功的构建出带有报告基因eGFp的piReS2--hiL-10真核表达载体,目的基因进行了序列测定和相似性比对,结果显示与GeneBank基因序列完全一致。同时,酶切、pCR鉴定结果显示构建成功。这将为下一步研究iL-10在诱导器官移植免疫耐受中的作用奠定前期基础。

[参考文献]

[1]FiorentinoDF,Bondmw,mosmanntR.twotypesofmousethelpercell.iV.th2clonessecreteafactorthatinhibitscytokineproductionbyth1clones[J].Jexpmed,1989,170(6):2081-2095.

[2]傅继东.白介素-10、树突状细胞及免疫耐受[J].国外医学:免疫学分册,2001,24(3):133-136.

[3]SteinbrinkK,Grauliche,KubschS,etal.CD4(+)andCD8(+)anergictcellsinducedbyinterleukin-10-treatedhumandendriticcellsdisplayantigen-specificsuppressoractivity[m].Blood,2002,99(7):2468-2476.

[4]Liwm,Liuw,GaoC,etal.antigen-specifictoleranceinducedbyiL-10genemodifiedimmaturedendriticcellsinexperimentalautoimmunemyocarditisinrats[J].ChinmedJ,2006,119(19):1646-1652.

[5]SilvaSR,JacysynJF,macedomS,etal.immunosuppressivecomponentsofascarissuumdown-regulateexpressionofcostimulatorymoleculesandfunctionofantigen-presentingcellsviaaniL-10-mediatedmechanism[J].eurJimmunol,2006,36(12):3227-3237.

[6]ZhouX,Yangn,LuL,etal.Up-regulationofiL-10expressionindendriticcellsisinvolvedintrichosanthininducedimmunosuppression[J].immunolLett,2007,110(1):74-81.

转正考核鉴定表个人总结篇9

目的:构建pcdna3.1mox40ig真核表达载体,转染cho细胞进行稳定表达,获得有生物学活性的mox40ig融合蛋白。方法:rtpcr法扩增获得higg1fc段基因,构建pcdna3.1higg1fc重组质粒并经测序证实。从本室保存的pires2egfpmox40重组质粒中pcr扩增mox40胞外段,将其插入pcdna3.1higg1fc重组质粒中构建pcdna3.1mox40ig真核表达载体。脂质体法转染cho细胞获得稳定表达,用rtpcr与elisa法检测其表达,蛋白a亲和纯化后,sdspage进行鉴定。3htdr掺入法研究ox40信号对b细胞的体外促增殖作用。结果:测序证实higg1fc段、mox40胞外段及mox40ig基因序列正确,rtpcr与elisa证实mox40ig的表达,sdspage证实其为mox40ig融合蛋白,3htdr掺入法显示mox40ig在体外能有效地促进b细胞增殖。结论:成功地构建pcdna3.1mox40ig真核表达载体,并获得有生物学活性的mox40ig融合蛋白的稳定表达,为进一步开展ox40相关领域的横向应用研究奠定了基础。

【关键词】ox40mox40igcho细胞真核表达

[abstract]aim:toconstructarecombinanteukaryoticexpressionvectorcontainingpcdna3.1mox40igfusiongeneandobtainmox40igfusionproteinwithbioactivitybytransfectingchocells.methods:thegenefragmentencodingthehumanigg1fcwasamplifiedbyrtpcrandtheeukaryoticexpressionvectorpcdna3.1higg1fcwasconstructed.aftersequencing,mox40extracellulargenewasclonedfrompires2egfpox40bypcrandtheninsertedintotherecombinantvectorpcdna3.1higg1fc.therightrecombinantwastransfectedintochocellswithlipofectinragentanditsexpressionwasdetectedbyrtpcrandsandwichelisa.afterpurifiedbyproteinaaffinitycolumnchromatography,themox40igfusionproteinwasidentifiedbysdspageanditseffectontheproliferationofbcellsinvitrowasstudiedby3htdrmethod.results:thehigg1fc,mox40extracellulargeneandmox40iggenewereconsistentwithdnasequencing.theexpressionofmox40igfusionproteininchocellswasconfirmedbyrtpcr,sandwichelisaandsdspage.3htdranalysisshowedthemox40igfusionproteinstimulatedtheproliferationofbcellsinvitro.conclusion:aeukaryoticexpressionvectorcontainingpcdna3.1mox40ighasbeenconstructedsuccessfullyandthestableexpressionofmox40igfusionproteinwithbioactivityhasbeenacquired,whichlaysasolidbasisforfurtherstudyoftheapplicationrelatedtoox40.

[keywords]ox40;mox40ig;chocellline;eukaryoticexpression

ox40/ox40l作为免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,对延长t细胞的寿命、促进其增殖[1,2]、刺激dc细胞的分化成熟[3]、促进生发中心的形成均有重要的作用[4]。www.133229.Com本研究我们通过构建pcdna3.1mox40ig真核表达载体,将其转染cho细胞,获得可溶性mox40ig融合蛋白的稳定表达,并进行初步的鉴定和生物学活性检测,为进一步研究ox40分子在肿瘤免疫、自身免疫性疾病中的作用奠定基础。

1材料和方法

1.1材料trizol购自gibco公司;mmlv第1链cdna合成试剂盒、taqdna聚合酶、各种限制性内切酶及t4连接酶均购自mbi公司;agarose（西班牙分装）购自上海生工公司;lipofectinreagent购自invitrogen公司。胎牛血清购自杭州四季青公司。g418购自北京华美公司。蛋白a亲和层析柱购自本元正阳公司。羊抗人igg、正常人igg、hrp标记鼠抗人iggfc购自宁波新芝生物公司。小鼠migm激发型抗体及抗cd40激发型单克隆抗体(mab)购自r&d公司。3htdr购于中国原子能科学研究院。

1.2方法

1.2.1引物的设计与合成根据genbank中登录的人igg1fc段及小鼠ox40胞外段cdna序列,利用引物设计软件primerpremier5.0进行引物设计,全部引物由上海生工合成。higg1fc段上、下游引物p1、p2为:5′cggaattcacttgcccaccgtgcccag3′,含ecori的酶切位点,5′ccgctcgagtcatttacccggagacagggag3′,含xhoi的酶切位点。小鼠ox40胞外段上、下游引物p3、p4为:5′cgggatccaagatgtatgtgtgggttcag3′,含bamhi的酶切位点,5′cggaattcaggtccctcaggagtcac3′,含ecori的酶切位点。

1.2.2rtpcr法扩增higg1fc段基因ficoll密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞后,按trizol试剂盒说明书抽提总rna。rtpcr反应体系为20μl:在冰浴的eppendorf管中依次加入总rna5μl,随机引物1μl和无rna酶去离子水6μl,轻轻混匀后70℃水浴5min置冰上,再加入5×reactionbuffer4μl,rnaseinhibitor(200万u/l)1μl及dntpmix(10mmol/l)2μl,轻轻混匀后37℃水浴5min,再加入1μlrevertaidtmmmulv逆转录酶(200万u/l),反应混合物在25℃温育10min后,37℃水浴60min,再70℃加热10min结束反应后,冷冻保存于-20℃备用。以上述逆转录cdna为模板,p1、p2为上下游引物扩增higg1fc段基因,反应条件为:95℃预变性5min后,以94℃变性1min,56℃退火1min,72℃延伸1min,为1个循环,共32个循环,最后再于72℃延伸10min。

1.2.3重组pcdna3.1higg1fc的构建higg1fc段pcr产物纯化后与pcdna3.1载体分别经ecori和xhoi双酶切37℃,4h,65℃水浴灭活20min,割胶回收酶切后的目的片段,连接转化感受态细菌;筛选阳性克隆经质粒pcr、限制性酶谱分析及测序分析确证。

1.2.4pcr法扩增小鼠ox40胞外段以本室构建鉴定并保存的pires2egfpox40重组质粒为模板,以p3、p4为上下游引物扩增小鼠ox40胞外段基因,反应条件为:95℃预变性5min后,94℃变性55s,55℃退火1min,72℃延伸1min,为1个循环,共30个循环,最后再于72℃延伸10min。

1.2.5真核表达载体pcdna3.1mox40ig的构建小鼠ox40胞外段pcr产物纯化后与测序正确的pcdna3.1higg1fc重组质粒分别用bamhi和ecori进行双酶切,37℃,4h后置65℃灭活20min,16℃连接过夜,转化感受态dh5α菌株,筛选阳性克隆即重组真核表达载体pcdna3.1mox40ig;重组质粒分别经质粒pcr、限制性酶谱分析及测序分析证实。

1.2.6表达mox40ig的cho细胞株的构建及稳定转染将pcdna3.1mox40ig重组质粒以脂质体法转染96孔板中已70%～80%融合的cho细胞。转染48h后,置于含g418的选择培养液中,筛选培养2周后再用有限稀释法挑取阳性克隆。

1.2.7rtpcr检测外源ox40igmrna的表达收集g418抗性细胞,trizol法抽提总rna,逆转录获得cdna后分别以p3+p4、p3+p2、p1+p2为上下游引物进行pcr扩增,琼脂糖电泳测定扩增产物。

1.2.8夹心elisa法检测上清中mox40ig融合蛋白的表达用10mg/l的羊抗人igg包被酶标板,酶标抗体为hrp标记鼠抗人iggfcmab,同时以正常人igg为阳性对照,以转染有pcdna3.1空载体的细胞培养上清为阴性对照。

1.2.9蛋白a亲和层析柱纯化及纯化蛋白的鉴定样品的纯化按说明书进行。sdspage完毕后以考马斯亮蓝g250染液染色,鉴定纯化后mox40ig融合蛋白的分子量。

1.2.10小鼠b淋巴细胞的制备小鼠眼球放血处死,无菌取脾脏,移入滤网中研磨,用ficoll分离单个核细胞。pbs洗后,贴壁2h去除贴壁细胞,吸出富集的b细胞备用。

1.2.11淋巴细胞增殖试验将反应b细胞按1×105个/孔的浓度加到预先用抗小鼠migm激发型抗体（1mg/l）包被的96孔板中,同时加入或不加入抗小鼠cd40激发型抗体（1g/l）。培养2d后,分别加入1∶10、1∶20、1∶40倍比稀释的纯化mox40ig,同时设阴性对照（不同浓度的人igg）,空白对照（含100ml/lfcs的rpmi1640培养液）,每组设5个复孔。在37℃、50ml/lco2培养箱中共培养2d,加入3htdr(0.5μci/孔),于37℃共育16h。将细胞收集于24nm玻璃纤维纸片上,使用β液体闪烁计数器测定每个样品的cpm值。

1.2.12统计学处理采用sas8.0软件对数据进行单因素方差分析和多元方差分析。

2结果

2.1higg1fc段基因的扩增及重组载体pcdna3.1higg1fc的构建rtpcr法从正常人外周血单个核细胞中扩增出约650bp的higg1fc段基因（图1）,重组载体经pcr、限制性酶谱分析后（图2）进行dna测序。结果显示,所获得的higg1fc段基因序列与genbank中报道的序列完全一致。

图1rtpcr法扩增人igg1fc段基因电泳检测（略）

fig1theagaroseelectrophoresisofrtpcrproductofhumanigg1fcgene

1:dnamarker;2:cdnafragmentencodingthehumanigg1fc;3:βactin.

图2重组载体pcdna3.1higg1fc的酶切鉴定（略）

fig2resultsofrecombinantpcdna3.1higg1fcdigestedbyecoriplusxhoi

1:dnamarker;2:pcdna3.1higg1fc/ecori+xhoi;3:pcdna3.1;4:pcdna3.1higg1fc.

2.2小鼠ox40胞外段的扩增及真核表达载体pcdna3.1mox40ig的构建pcr法扩增获得的小鼠ox40胞外段基因约690bp左右（图3）,重组真核表达载体pcdna3.1mox40ig经质粒pcr（图4）、限制性酶谱分析（图5）后进行dna测序。结果显示,所获得的小鼠ox40胞外段及higg1fc段基因序列均与genbank中报道的序列完全一致,并且拼接后的小鼠ox40胞外段及higg1fc段基因未发生移码突变。

图3pcr扩增小鼠ox40胞外段基因电泳检测（略）

fig3amplificationofmouseox40extracellulargenebypcr

1:dnamarker;2:mouseox40extracellulargene.

图4重组载体pcdna3.1mox40ig的pcr鉴定结果（略）

fig4pcranalysisofrecombinantpcdna3.1mox40ig

1:thehumanigg1fcgene;2:dnamarker;3:mouseox40extracellulargene;4:mox40＋higg1fc.

图5重组载体pcdna3.1mox40ig的酶切鉴定（略）

fig5restrictiveenzymedigestionanalysisofrecombinantpcdna3.1mox40ig

1:λdna/ecori+hindiiimarker;2:pcdna3.1mox40ig;3:pcdna3.1mox40ig/ecori+xhoi;4:pcdna3.1mox40ig/bamhi+xhoi;5:pcdna3.1mox40ig/hindiii+xhoi;6:dnamarker.

2.3mox40ig的表达、纯化及鉴定

2.3.1rtpcr检测将鉴定正确的pcdna3.1mox40ig以脂质体法转染cho细胞,经g418筛选获得稳定表达mox40ig的细胞株。rtpcr鉴定表明,从cho/mox40ig细胞中能扩增出小鼠ox40胞外段（约650bp）、higg1fc（约690bp）及mox40ig（约1330bp）特异性条带;而转染pcdna3.1的细胞样品未扩增出特异性条带（图6）。

图6稳定表达mox40ig的cho的rtpcr鉴定（略）

fig6identificationofmox40igstablyexpressedchobyrtpcr

1:dnamarker;2-4:thechocellstransfectedwithpcdna3.1mox40ig;5:thechocellstransfectedwithpcdna3.1.

2.3.2转染细胞上清的双抗体夹心elisa法检测结果为了检测上清中是否有mox40ig融合蛋白的表达,我们建立了一种针对mox40ig融合蛋白中fc段的夹心elisa检测法。阴性对照为转染有pcdna3.1空载体的细胞培养上清,阳性对照为纯化的人igg。结果显示:阳性转染细胞上清与阳性对照的a490值接近,其与阴性对照组及空白调零组（pbst）的差异均有统计学意义（p<0.01）。我们认为据此可初步判定上清中有目的蛋白—可溶性mox40ig融合蛋白的表达。取1次收集的上清原液作一系列倍比稀释后夹心elisa检测结果如图7所示。

图7夹心elisa检测mox40higg1fc的表达（略）

fig7confirmationofthefusionproteinmox40igexpressionbysandwichelisaassay

2.3.3mox40ig融合蛋白表达的sdspage鉴定收获pcdna3.1mox40ig转染cho细胞培养上清,经蛋白a纯化后,取20μl在还原条件下进行sdspage分析,结果显示:在还原条件下,转染有pcdna3.1mox40ig的细胞上清纯化后可见有一mr位于66.2×103～43×103之间的特异性蛋白带（图8）,mox40ig融合基因编码434个氨基酸,切除可能的含19个氨基酸的信号肽后,还剩415个氨基酸,mr46.3×103（单体且未糖基化时）。考虑到真核表达过程中糖基化对分子量的影响,可认为与估计的mr46.3×103基本相符。

2.4mox40ig融合蛋白对b细胞的体外促增殖作用mox40ig融合蛋白能有效促进b细胞增殖,说明我们获得了有生物学活性的mox40ig融合蛋白,并且随着其浓度的增高,促增殖效应越明显,但其作用强度不如抗cd40mab明显（p<0.05）,两者联合应用的促增殖效应较单独应用mox40ig融合蛋白或抗cd40mab均具有统计学意义（p<0.05,图9）。

图8mox40ig融合蛋白的sdspage鉴定（略）

fig8identificationofrelativemolecularweightofthefusionproteinmox40ig

图9mox40ig对小鼠b细胞的体外促增殖作用（略）

fig9theinfluenceonbcellproliferationstimulatedwithmox40iginvitro

3讨论

ox40/ox40l是免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,它们的相互作用能促进cd4+t细胞的活化、增殖、迁移,延长其寿命,并促进生发中心的形成和dc的分化成熟。ox40（cd134）,是tnfr超家族成员之一,为i型跨膜糖蛋白,属活化后诱导表达,即只表达于活化的t细胞表面,且主要是cd4+t细胞,cd8+t细胞表面有少量表达[5]。表达ox40的t细胞只在炎症处存在,其阳性t细胞是抗原特异性t细胞,在外周血中不存在,其表达时相较晚且短暂,这些特点成为其治疗由t细胞介导的多种自身免疫性疾病及防治移植排斥的有利条件。除此之外,在对免疫耐受影响的研究中发现,许多共刺激分子都可以阻止耐受的形成,而耐受一旦形成,只有ox40可以打破已建立的外周耐受[6],从而可以打破肿瘤的免疫耐受,恢复免疫监视。以往研究显示,ox40/ox40l在机体的免疫应答和多种疾病中均起重要作用,而通过对ox40及其配体相互作用的干预可能是治疗多种人类疾病的有效途径之一[7]。

有研究显示,ox40胞外段与各种igg的fc段融合构建的融合蛋白中,与igg1的fc段融合所构建的融合蛋白与ox40l结合的亲和力最强[8]。本研究中,我们将ox40胞外段与igg1fc段融合构建了pcdna3.1mox40ig真核表达载体,转染cho细胞后,经rtpcr、双抗体夹心elisa及sdspage分析证实我们获得了mox40ig融合蛋白的分泌性表达。同时,我们对mox40ig融合蛋白的功能进行了初步的体外研究。3htdr掺入试验表明,分泌表达的mox40ig融合蛋白能够明显促进b细胞增殖,若将其与抗cd40mab共同作用于b细胞,其促增殖作用更为明显。本研究中我们成功地构建了pcdna3.1mox40ig真核表达载体,将其转染cho细胞,获得了可溶性mox40ig融合蛋白的稳定表达,并进行了初步的鉴定和生物学活性检测,为进一步研究ox40分子在移植耐受的诱导及自身免疫病治疗中的作用打下良好的基础。

【参考文献】

[1]huddlestonca,weinbergad,parkerdc.ox40(cd134)engagementdrivesdifferentiationofcd4+tcellstoeffectorcells[j].eurjimmunol,2006,36(5):1093-1103.

[2]mendeli,shevachem.activatedtcellsexpresstheox40ligand:requirementsforinductionandcostimulatoryfunction[j].immunology,2006,117(2):196-204.

[3]wangyh,itot,wangyh,etal.maintenanceandpolarizationofhumanth2centralmemorytcellsbythymicstromallymphopoietinactivateddendriticcells[j].immunity,2006,24(6):827-838.

[4]原江水,冯永堂,王菲,等.小鼠ox40稳定表达细胞株的构建及其对b细胞促分化作用的研究[j].细胞与分子免疫学杂志,2005,21（6）:767-771.

[5]songa,songj,tangx,etal.cooperationbetweencd4andcd8tcellsforantitumoractivityisenhancedbyox40signals[j].eurjimmunol,2007,37(5):1224-1232.

[6]bansalp,jemberag,groftm.signalingthroughox40(cd134)breaksperipheraltcelltolerance[j].natmed,2001,7(8):907-912.

转正考核鉴定表个人总结篇10

关键词：技工院校；职业技能鉴定；机制研究

评估技工院校人才培养质量的主要考核活动是评定职业技能。之前技工院校使用终结性鉴定形式来评定学生的职业技巧，但这种形式存在一些不足之处：无法提起学生学习的兴趣、评定的内容无法准确体现出学生的真实水平、评定难度较大等问题。通过调查研究，我们提出了创建三维一体的课程体制，主要凭据是国家职业标准，变革教学内容的技能评定过程化评价的新形式，在学习时实行过程性评价，知行合一，加强融合教学、实训、实习，调动学生学习的积极性，大力培养高技能人才。

1技工院校中职业技能鉴定的重要性

随着我国职业教育的发展和经济社会的进步，社会不断提升对高技能人才的职业素养，高职人才培养主要是培养技能型人才。国家非常关注职业技能评定工作，并且在《人力资源和社会保障部办公厅关于做好十二五期间职业技能鉴定工作的意见》中指出：“通过广泛运用院校评定管理平台，增强管理院校学生职业技能评定，严格遵守考评制度，使技工院校职业技能的评定质量大大提升。研究并且制定过程化考核方法，推进一体化教学课程改革。”在科技发展和技工行业飞速进步的过程中，不仅不断增加对人才的需求量，还对既有理论水平又有实操能力同时有“双证书”的技能型人才提出了更高的要求。为了适应社会经济发展，同时实现技工院校专业人才的培养目标，各个技工院校展开了职业技能的评定工作和职业技能的培训，不仅为学生就业创业打下了基础，而且提升了学生的工作能力。

2对技工院校学生职业技能过程性评价模式的调查研究与实施

2.1过程性评价的内容

技工院校学生职业技能评定过程性评价的主要内容：综合职业能力，依据：国家职业标准。坚持四个原则：过程性评价和最终考核相结合，学生职业素养和岗位需求相结合，学习才干和工作实力相结合，技工院校主导和企业参与相结合。技工院校把专业模块考核方案、鉴定要素详情表与考核内容结构表、专业主要课程与国家职业标准的评定点相比较，确定实际操作能力及理论知识评定点各占到整体的比例。从研究结果可以看出，过程性评价和国家职业标准有较大的重合率，对国家职业标准及专业人才培养的需求有很大的辅助作用。通过对专业课程核心知识与国家职业标准的对比研究，技工院校的中高级工的核心专业课程有4~6门左右，每门专业课又含有许多任务。技工院校制订专业课程教学计划，运用过程性评价的模式进行教学，过程性评价始终贯通在教学里，专业课程学习的内容和过程性评价内容珠联璧合，使学生可以自觉主动学习，提高学生学习效率。

2.2过程性评价的工作过程

学校和市职业技能鉴定指导中心共同安排技工院校学生进行职业技能评定过程性评价工作。学校按照被实行对象和要求上交材料，市职业技能鉴定指导中心进行专业评价。通过后，学校负责制订过程性评价的计划与课程考核评估方案，实行过程性评价、审核考生资格以及上报总的成绩等。而市职业技能鉴定指导中心负责监控整个过程，鉴定过程性评价的计划，考察成绩及发放证书等。过程性评价实施“离开”制，市职业技能鉴定指导中心会定时安排专家对学校进行多次审核，实行过程中有严重违规现象的院校将被“离开”；再次审核不通过的院校和专业将被退出。（1）将过程性评价计划进行存案：实行过程性评价初期，学校将过程性评价计划报告给市鉴中心，进行存案和鉴定处理。（2）对考生信息进行考核：学校对参与鉴定的学生进行检查，市职业技能鉴定指导中心负责抽查审核考生是否有参与资格。（3）实施过程性评价:根据审定通过的方案，学校安排学生参与各阶段的评价，将学生考核资料进行归档。（4）管理过程性评价：市职业技能鉴定指导中心不定期进行监察。（5）设立委任考评员制度:由社会化考评员以及学校推选的有“证”的相关专业教师担任，再由学校向市职业技能鉴定指导中心进行报告，方便其进行考察。（6）制定监察“考核过程”的制度:由市职业技能鉴定指导中心执行。（7）其他情况:评价不达标的考生，按其他方式进行评定。

2.3怎样实施过程性评价

技工院校学生职业技能评定过程性评价使用“一体化”的形式对课程进行考核评估，分别是学习任务的考核和综合任务的考核。由于各个院校各的具体情况有所不同，两个考核任务的比例也有所不同，总而言之，课程总成绩=学习任务的考核成绩×其所占比重+综合任务的考核成绩×其所占比重。在这两项任务的考核过程当中，所设立的考核及评价内容不同，遵照现有的标准，评价形式多样化，共同组合作为评价的总成绩。2.3.1学习任务的考核成绩任务考核主要采取过程性评价中的评分标准表进行评分。由任课教师和有“证”的教师对平时考核成绩进行打分，然后算出平均分。主要专业课程的成绩达到合格，且每门主要专业课程成绩的总和取平均值即为学习任务的考核成绩。学生参与综合任务考核的前提是学习任务的考核成绩必须合格，如果任意一门主要专业课程的学习成绩没有达到及格标准，相应课程的补考学生必须要参加，补考通过则该课程成绩按60分记录。2.3.2综合任务的考核成绩任务考核是学校聘邀校企合作的企业专家评估该课程的考核成绩。各门主要专业课程的成绩都在合格及以上，平均每门主要专业核心课程成绩的总分得到的分数就是综合任务考核成绩。2.3.3计算最终鉴定的成绩在综合任务和学习任务的考核成绩都达到合格时，按照各技工院校以上两者所占比重计算最终技能鉴定成绩，成绩合格意味着职业技能鉴定为合格，而在“一体化”教育的体制中，专业技能鉴定的理论成绩相当于实际操作成绩。2.3.4职业技能鉴定证书的发放在各技工院校汇总完学生的考核成绩之后，提交给市职业技能鉴定指导中心进行考察；理论成绩、实际操作成绩均合格的，发放国家职业资格证书。

2.4过程性评价安排实施

学校实行过程性评价，而市职业技能鉴定指导中心进行监管。各技工院校拟定过程性评价的实行计划，且让市职业技能鉴定指导中心进行评估审核，再安排详细的过程。整个过程在市职业技能鉴定指导中心的鉴定下进行，保证正常开展过程性评价活动。明确实施对象：技工院校的试验班级、专业及重点课程。实施前的准备工作：培训教师的技能，明确课程所需的教材与设备，制订专业所需的教学计划、考核计划和规则。具体过程：组织学生划分成小组，通知学生评价与考核的规则，根据考核规则认真进行教学，运用过程性评价对课程进行考核与评价，学期结束后对评价结果进行整合。

2.5控制过程性评价的质量

技工院校学生职业技能评定过程性评价涉及多个层面，多个环节，众多的参与人员以及很长的组织周期，所以应该把评价工作置于制度的监督、全员监督及行政的监督等多方面、多角度的监督中，构建一个全面的评价控制系统，逐渐完善与过程性评价相匹配的管理体制和质量监督体制。保障工作团队的胜任能力：对工作团队进行培训、交流以及指导等，使其知晓国家职业标准和专业标准，了解职业技能考评的原则和条件，保证其实行过程性评价这个工作可以称职。保障内容资源建设质量：根据国家颁发的“一体化”课程标准及规则，学校应设立并且完备“一体化”课程的教学资源，确保师资、教学设备及考核场地的质量，且聘邀校企合作的企业专家、校内同行等参与内容资源的开发，以及建设内容资源不断完善的体制。保障评价过程管理体系：开展以学校实施、市职业技能鉴定指导中心进行监管的管理过程。市职业技能鉴定指导中心通过抽查监督关键流程，不定时指导监管学校过程性评价的工作。保障管理及规章制度：保障过程性评价工作团队能按照要求进行工作，确保过程性评价工作可以顺利进行。

3对技工院校学生职业技能鉴定过程性评价工作建议

3.1重视职业种类的发展趋向，强化技工院校的过程性评价形式

积极探究职业种类的发展势头，进一步发挥职业技能鉴定的引领作用，修订最新的职业准则，有效地将职业技能鉴定和技工院校人才培养连接起来，评估、监测职业教育成果的教学设置及参考准则的设定，并将其变为技能鉴定的新标准，技工院校的学生通过技能鉴定能够展现出真实的水平，以此使职业技能鉴定的质量提升，适应经济建设进步的需求，同时满足企业对技能人才的需求。

3.2实现观念转变，充分落实“放、管、服”要求

应该更新观点和理念，领会职业资格鉴定制度的功效与价值，以此来鼓励大众创新创业、提高就业率、成为刺激整个社会创新创业的潜力与生机的良好途径和职业资格制定的出发点与落脚点。坚持以问题为导向，完善相关体制，推动体系建设，坚持落实“放、管、服”的要求，改进管理服务的形式，评价主体等在相关部门协作下，明确各自分工、共同合作，制定一致的管理准则和服务体制，健全制度体系。

4灵活使用不同的评价方式，反馈有效的使用评价结果

过程性评价是一个体系，由相关部门做“领头羊”，进行组织，是技工院校建立技能人才的评估准则，有利于培养多元化人才。过程性评价应根据教学要求灵活使用多种评价方法进行评价。在学习时进行评价，可以有效地推进学习与评价两个过程的融合，从而获得教、学、做的反馈。过程性评价体现了终身学习的理念并且对此进行了实践，过程性评价即将成为推动可持续发展和人类终身学习的过程。

5结语

综上所述，高技能人才培养的保证是国家职业资格证书制度，结合技工院校教学的实际，有效地连接职业技能鉴定和教学，提出技能鉴定和培养高技能人才的“过程化”模式，保证技工院校技能鉴定工作成功进行。这样，不仅能提升职业技能鉴定的质量，还能更顺利地培养高技能人才，各个技工院校也能顺利地实施“双证书”的制度。

参考文献

[1]马玉青.试析技工院校机械专业基础课教材与职业技能鉴定如何接轨[J].职业，2017(25).

[2]邰燕.高校学生职业技能鉴定现状及新模式探讨[J].传播力研究，2018(31).

---